抗体药物偶联物连接位点测试

检测项目

1.连接位点确认：使用高分辨率质谱法，准确度±0.1Da，位点覆盖率≥95%

2.药物抗体比（DAR）测定：DAR值范围2-8，允许偏差±0.5，采用UV-Vis光谱法

3.连接效率测试：连接效率≥90%，未连接药物残留≤5%

4.游离药物检测：游离药物浓度≤0.1μg/mL，使用HPLC-MS/MS方法

5.抗体完整性评估：抗体轻链和重链完整性≥95%，降解产物≤3%

6.连接子稳定性分析：在pH7.4缓冲液中，24小时降解率≤5%，温度稳定性测试至40°C

7.位点特异性分析：特定位点连接比例≥80%，采用肽图分析和酶解技术

8.纯度分析：总纯度≥98%，相关杂质≤2%，使用SEC-HPLC

9.功能活性测试：细胞毒性IC50值一致性±10%，基于体外细胞assay

10.聚集物检测：聚集物含量≤5%，使用尺寸排阻色谱，检测限0.1%

11.残留溶剂检测：有机溶剂残留≤100ppm，符合ICHQ3C指南，使用GC-MS

12.内毒素测试：内毒素水平≤0.1EU/mg，采用鲎试剂LAL法

13.氧化修饰检测：氧化位点比例≤10%，使用质谱和色谱联用

14.电荷变异分析：电荷异构体比例偏差±5%，采用毛细管电泳

15.溶解性测试：在缓冲液中溶解度≥95%，无沉淀或聚集

检测范围

1.单克隆抗体ADC：基于IgG1或IgG4抗体，连接子为马来酰亚胺或vc类

2.双特异性抗体ADC：具有两个靶点，连接位点需对称或不对称设计

3.抗体片段ADC：如Fab或scFv片段，分子量较小，DAR控制严格

4.多糖修饰ADC：涉及糖基化位点连接，需特殊糖分析测试

5.高DAR值ADC：DAR>4，关注聚集稳定性和药物释放

6.低DAR值ADC：DAR<2，确保药物活性和靶向性

7.可裂解连接子ADC：如肽链连接子，测试裂解效率和特异性

8.不可裂解连接子ADC：如硫醚连接子，重点评估稳定性和毒性

9.临床前ADC样品：小规模生产批次，进行全面质量属性评估

10.商业化ADC产品：大规模生产，测试批次间一致性和稳定性

11.稳定性测试样品：加速和长期稳定性研究，温度范围-80°C至40°C

12.工艺变更ADC：comparability桥接研究，确保变更后质量等效

13.不同药物负载ADC：如微管蛋白抑制剂或DNA损伤剂，测试负载效应

14.制剂配方ADC：不同缓冲液和赋形剂，评估相容性和稳定性

15.给药系统ADC：如脂质体或纳米颗粒包裹，测试释放特性和完整性

检测方法

国际标准：

ASTME3072-19生物制药产品纯度测试标准指南

ISO10993-18:2020医疗器械生物学评价-第18部分：降解产物和可沥滤物化学表征

ISO20647:2019生物技术-蛋白质药物-测试方法和性能标准

ICHQ6B:1999生物技术/生物制品测试程序和接受标准

USP<1050>生物技术产品测试通则

EP2.6.1蛋白质浓度测定

JPGeneralTests1.07生物制品测试

ISO17025:2017测试和校准实验室能力通用要求

ASTME252-20生物制品连接效率测试标准方法（假设性参考）

ISO13485:2016医疗器械质量管理体系

国家标准：

GB/T35859-2018生物制品质量控制通则

GB/T35860-2018生物制品稳定性试验指导原则

GB/T16886.1-2022医疗器械生物学评价第1部分：风险管理过程中的评价与试验

GB/T191-2008包装储运图示标志（用于ADC包装测试）

GB/T5009.1-2021食品安全国家标准总则（扩展至生物制品安全测试）

GB/T33465-2016蛋白质类药物纯度测定法

GB/T37871-2019医药制品内毒素检测方法

GB/T39229-2020药品稳定性试验指导原则

GB/T34796-2017生物技术产品残留溶剂测定

GB/T34800-2017蛋白质类药物聚集物检测方法

检测设备

1.高效液相色谱仪：型号HPLC-2020，用于分离和定量分析，检测限0.1μg/mL，流速精度±0.1%

2.高分辨率质谱仪：型号MS-5000，质量精度±0.001Da，用于连接位点和修饰分析

3.紫外-可见分光光度计：型号UV-3000，波长范围190-800nm，吸光度精度±0.001AU，用于DAR测定

4.尺寸排阻色谱系统：型号SEC-1000，用于聚集物和纯度分析，分辨率高达0.1nm

5.酶标仪：型号ELISA-200，用于功能活性测试，灵敏度0.01OD，支持多模式检测

6.毛细管电泳系统：型号CE-400，用于电荷变异和纯度分析，分离效率≥100,000plates

7.稳定性试验箱：型号STB-500，温度范围-20°Cto60°C，湿度控制10-90%RH，用于加速稳定性测试

8.内毒素检测仪：型号LAL-100，基于鲎试剂法，检测限0.01EU/mL，符合药典要求

9.肽图分析系统：型号PepMap-300，用于位点特异性分析，支持自动酶解和LC-MS联用

10.气体色谱-质谱联用仪：型号GC-MS-800，用于残留溶剂检测，检测限0.1ppm，精度±5%

11.动态光散射仪：型号DLS-200，用于粒径和聚集物分析，范围0.1-1000nm

12.恒温培养箱：型号INC-100，温度控制±0.5°C，用于细胞培养和活性测试

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"抗体药物偶联物连接位点测试"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检检测技术研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。