可送检的样品类型与对应检测项目

样品类型 典型应用场景 主要检测项目 常用方法 / 参考
自然流唾液（全唾液） 昼夜节律筛查、睡眠相位研究、健康人群基线调查 褪黑素浓度昼夜曲线、暗光褪黑素起始时刻、夜间峰值浓度、达峰时间 酶联免疫吸附法、液相色谱-串联质谱法
棉棒收集管唾液 居家定时多点采样、远程寄样检测、大规模队列研究 定时点褪黑素浓度、节律相位标志、峰值与谷值浓度比值 棉棒离心取上清后酶联免疫吸附法测定
唾液上清液（冻存样本） 已离心分装样本的批量检测、多中心研究数据汇总 褪黑素定量、批间稳定性评价、反复冻融稳定性 液相色谱-串联质谱法，辅以酶联免疫吸附法比对
定时系列唾液样本 轮班人员健康监测、时差与光照干预研究、睡眠科学课题 褪黑素分泌振幅、相位偏移量、暗光起始时刻变化 多点定时采样结合酶联免疫吸附法
实验动物唾液样本 大鼠、仓鼠等模式动物昼夜节律与光周期研究 唾液褪黑素浓度、昼夜节律相位、夜间峰值水平 液相色谱-串联质谱法（微升级进样量适配）
血清血浆对照样本 唾液与血液褪黑素同步比对、方法学一致性评价 总褪黑素浓度、昼夜节律曲线对比 液相色谱-串联质谱法
人工唾液加标样品 方法检出限验证、加标回收率评价、基质效应评估 检出限、定量限、回收率、批内与批间精密度 方法确认与验证程序按GB/T 27417-2017执行

检测项目

1. 唾液褪黑素昼夜浓度曲线：昼间基线一般低于5pg/mL，夜间峰值常见10-40pg/mL，昼夜波动幅度可达10倍以上

2. 暗光褪黑素起始时刻：常用3pg/mL阈值法或2倍基线法判定，健康成人多出现在习惯就寝前1-2小时

3. 峰值浓度与达峰时间：峰值时段多集中在01:00-03:00，达峰时间与峰值水平个体差异明显

4. 方法灵敏度指标：酶联免疫吸附法检出限0.3-3pg/mL，液相色谱-串联质谱法检出限可达0.05-0.5pg/mL

5. 精密度与准确度：批内变异系数不高于10%，批间变异系数不高于15%，加标回收率80%-120%

6. 样本稳定性指标：2-8℃条件下24小时内完成处理，-20℃及以下长期冻存，反复冻融不超过3次

检测范围

1. 唾液样本：自然流唾液、棉棒收集管唾液、离心后唾液上清液等

2. 定时采样系列：17:00至次日02:00每30-60分钟采集1点、共8-12点的节律采样方案

3. 实验动物唾液：大鼠、仓鼠等模式动物唾液及颌下腺分泌液

4. 对照体液样本：血清、血浆褪黑素同步比对样本

5. 方法学验证样品：人工唾液基质加标样品与空白对照样品

检测方法

1. GB/T 5009.170-2003 保健食品中褪黑素含量的测定（高效液相色谱法，唾液样本色谱分离条件参考）

2. GB/T 27025-2019 检测和校准实验室能力的通用要求

3. GB/T 27417-2017 合格评定 化学分析方法确认和验证指南

4. GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法

5. GB/T 8170-2008 数值修约规则与极限数值的表示和判定

检测设备

1. 酶联免疫吸附测定仪：双波长450nm与630nm，吸光度范围0-4.0

2. 液相色谱-串联质谱联用仪：电喷雾离子源，质量范围m/z 50-2000

3. 高速冷冻离心机：转速500-15000r/min，温控2-8℃

4. 分析天平：分度值0.01mg，十万分之一精度

5. 八道移液器：量程30-300μL，示值误差不高于±1%

6. 恒温孵育器：温度25-45℃，均匀性±0.5℃

7. 酶标板洗板机：8道与12道清洗，残液量低于2μL

8. 超低温冰箱：温度-80℃，温度波动±5℃

9. 氮吹浓缩仪：温控30-60℃，气流压力连续可调

10. 振荡混合器：转速100-1500r/min，带定时功能