可送检的样品类型与对应检测项目
| 样品类型 | 典型应用场景 | 主要检测项目 | 常用方法 / 参考 |
|---|---|---|---|
| 基因组DNA | 动植物种质鉴定、微生物分类研究、转基因成分筛查、物种溯源 | Tm值、增色效应、GC含量推算、A260/A280纯度比值、核酸浓度 | 紫外熔解曲线法(260nm,升温0.5~1℃/min);GB/T 44586.1-2024核酸质量评价 |
| 寡核苷酸引物与探针 | 引物探针设计验证、杂交条件优化、合成寡核苷酸质量确认 | Tm值、修饰前后ΔTm、浓度、纯度、熔解协同性 | 紫外熔解曲线法;GB/T 43629.1-2023合成寡核苷酸质量控制 |
| PCR扩增产物 | 扩增特异性确认、非特异扩增与引物二聚体排查、方法开发 | 熔解曲线单峰性、峰温Tp、产物Tm一致性 | qPCR熔解曲线法;GB/T 42077-2022 qPCR法性能评价 |
| 双链RNA/mRNA样品 | RNA药物热稳定性研究、dsRNA中间体与杂质评价 | Tm值、热变性可逆性、浓度与纯度 | 紫外熔解曲线法、差示扫描量热法 |
| 修饰核酸 | LNA、PNA、硫代修饰效果评价、适配体稳定性研究 | ΔTm、熔解协同性、热稳定性 | 紫外熔解曲线法、DSC;GB/T 43629.1-2023 |
| 核酸-配体复合物 | 小分子药物与DNA嵌合作用研究、染料结合效果评价 | 结合诱导ΔTm、结合化学计量、复合物热稳定性 | 紫外熔解曲线法、荧光光谱法 |
检测项目
1. 熔解温度Tm值:测定范围25~110℃,程序升温速率0.1~1℃/min,重复性RSD不大于0.5%
2. 增色效应:双链DNA热变性A260增幅典型值30%~40%,表征碱基堆积与双链完整性
3. GC含量推算:基于Tm经验公式换算,适用GC含量30%~75%(1×SSC缓冲体系)
4. 熔解曲线峰形分析:峰温Tp、峰宽与单峰性判别,高分辨率模式温度分辨率可达0.1℃
5. 核酸浓度与纯度:A260/A280比值1.7~2.0(DNA),定量范围2~2000ng/μL
6. 热稳定性ΔTm:修饰或结合前后Tm差值检出能力±0.3℃
检测范围
1. 基因组DNA:人源、动物、植物、微生物来源,片段长度覆盖0.2~50kb
2. 寡核苷酸:PCR引物、荧光探针、反义寡核苷酸与siRNA,长度10~60mer
3. 双链DNA片段:PCR扩增产物、限制性酶切片段,长度100~5000bp
4. 双链RNA样品:mRNA原液、dsRNA中间体及其制剂
5. 修饰核酸:LNA、PNA、磷硫酰修饰寡核苷酸及含CpG序列片段
6. 核酸-配体复合物:小分子化合物与双链DNA嵌合体系
检测方法
1. GB/T 47026-2026 快速核酸检测仪性能的测定方法
2. GB/T 44586.1-2024 体外诊断医疗器械 多重核酸分子检测 第1部分:核酸质量评价术语和通用要求
3. GB/T 42077-2022 生物技术 核酸靶序列定量方法的性能评价要求 qPCR法和dPCR法
4. GB/T 43629.1-2023 生物技术 核酸合成 第1部分:合成寡核苷酸的生产和质量控制要求
5. GB/T 39367-2025 体外诊断检测系统 基于核酸扩增的病原微生物检测和鉴定程序 实验室质量实践通则
6. GB/T 27403-2026 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测
检测设备
1. 紫外可见分光光度计(温控池架型):波长范围190~1100nm,控温范围4~100℃,控温精度±0.1℃,用于扫描熔解曲线
2. 实时荧光定量PCR仪:96孔,5~6荧光通道,温度范围4~100℃,孔间均一性±0.2℃,支持熔解曲线采集
3. 高分辨率熔解分析模块:温度分辨率0.01~0.1℃,配合饱和荧光染料用于序列差异分辨与基因分型
4. 超微量分光光度计:上样量0.5~2μL,检测下限2ng/μL,自动计算A260/A280与A260/A230比值
5. 差示扫描量热仪:温度范围-10~130℃,升温速率0.1~2℃/min,用于热力学参数精测
6. 恒温金属浴:室温~105℃,控温精度±0.1℃,用于样品退火复性与缓冲液预热
7. 石英比色皿:光程10mm与1mm两种规格,适用波段190~2500nm,配聚四氟乙烯盖
8. 精密pH计:测量范围-2~20pH,精度±0.001pH,用于缓冲液配制与校核
9. 磁珠法自动核酸提取仪:1~96通道可调,用于样品核酸的提取纯化与上样前处理