可送检的样品类型与对应检测项目
| 样品类型 | 典型应用场景 | 主要检测项目 | 常用方法 / 参考 |
|---|---|---|---|
| 荧光假单胞菌等生防假单胞菌 | 农作物土传病害生防菌剂研发、根际定殖能力评价 | 铁载体定性筛查、活性单位SU值定量、传代稳定性(连续传5代衰减率) | CAS平板变色圈法、CAS液相法(630nm)、GB/T 41727-2022功能评价 |
| 枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌 | 微生物肥料功能菌筛选、菌剂质量分级 | 铁载体活性单位、缺铁诱导表达量、菌浓OD600同步监测 | CAS铬天青S比色法、GB 20287-2006、GB/T 26428-2010 |
| 嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌等乳杆菌 | 益生菌株促生性状筛选、发酵剂菌株评价 | 铁载体分泌能力、化学分型(儿茶酚型/羟基肟型) | Arnow比色法、Csaky比色法、GB/T 20191-2025、GB 4789.35-2016 |
| 酿酒酵母、产朊假丝酵母 | 发酵工业菌株选育、饲料酵母质量评价 | 羟基肟型铁载体定量、胞外分泌动力学曲线 | Csaky比色法、GB/T 45033-2024、GB/T 41219-2021 |
| 大肠杆菌K12等科研用模式菌株 | 微生物获铁机制研究、基因功能验证 | 铁载体种类谱、缺铁与富铁对照实验、表达调控分析 | 微孔板CAS法、液相色谱定量、PAGE-CAS覆层电泳 |
| 链霉菌等放线菌 | 农用活性物质产生菌筛选、次级代谢研究 | 铁载体谱分析、紫外特征吸收扫描(λmax 400~430nm) | CAS法、薄层层析、紫外分光光度法 |
| 基因工程菌株 | 铁载体合成通路重构验证、表达量评价 | 目标铁载体定量、空载载体对照、遗传稳定性传代验证 | 液相色谱二极管阵列法、微液滴浊度法GB/T 38568-2020 |
检测项目
1. 铁载体定性筛查:CAS平板法,变色圈直径与菌落直径之比D/d≥1.5判为阳性,变色圈直径典型范围10~40mm
2. 铁载体活性单位定量:CAS液相法630nm测定,SU=(Ar-As)/Ar×100%,SU≥50%为强产铁载体株,检出下限约0.5μmol/L
3. 化学分型定量:Arnow法儿茶酚型515nm比色、Csaky法羟基肟型测定,定量范围0.5~50μmol/L
4. 荧光嗜铁素测定:脱铁型荧光嗜铁素激发波长400nm、发射波长455nm,定量范围0.1~50μmol/L
5. 缺铁诱导表达评价:限铁培养基铁本底≤1μmol/L,28℃培养48h,上清液10000×g离心10min后过滤测定
检测范围
1. 生防细菌:荧光假单胞菌、解淀粉芽孢杆菌、贝莱斯芽孢杆菌等
2. 芽孢杆菌类:枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌等
3. 乳杆菌类:嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌等
4. 酵母类:酿酒酵母、产朊假丝酵母、乳酸克鲁维酵母等
5. 放线菌类:灰色链霉菌、天蓝色链霉菌等科研用菌株
检测方法
1. GB/T 41727-2022 农用微生物菌剂功能评价技术规程
2. GB/T 38569-2020 工业微生物菌株质量评价 拉曼光谱法
3. GB/T 38568-2020 工业微生物菌株生长表型测定 微液滴浊度法
4. GB/T 26428-2010 饲用微生物制剂中枯草芽孢杆菌的检测
5. GB/T 20191-2025 饲料中嗜酸乳杆菌的微生物学检验
6. GB 20287-2006 农用微生物菌剂
7. GB/T 45033-2024 饲用微生物制剂中产朊假丝酵母的测定
8. CAS铬天青S比色法与Arnow邻苯二酚比色法按实验室验证协议执行,参照国际通用的Schwyn与Neilands铁载体检测体系
检测设备
1. 紫外可见分光光度计(UV-2600型):波长范围190~1100nm,光谱带宽1nm,用于630nm、515nm比色定量
2. 荧光分光光度计(F-4600型):激发400nm、发射455nm,波长精度±1nm,用于荧光嗜铁素测定
3. 酶标仪(Synergy H1型):配630nm滤光片,支持96孔微孔板高通量筛查
4. 高速冷冻离心机(5810R型):最大相对离心力21000×g,温控范围-9~40℃,用于上清液制备
5. 恒温培养箱(LRH-250型):控温范围4~60℃,温度精度±0.5℃
6. 生物安全柜(BSC-1100IIA2型):操作区洁净度ISO 5级,下沉风速0.25~0.40m/s
7. 液相色谱仪(1260 Infinity II型):C18柱2.1×100mm,二极管阵列检测器190~640nm
8. 高压蒸汽灭菌器(LDZX-75L型):控温范围105~137℃,自动控压排气
9. 台式pH计(PHS-3C型):测量范围0~14.00pH,精度±0.01pH,用于限铁培养基调配
10. 电子分析天平(FA2004型):量程0~200g,可读性0.1mg,用于Chelex树脂与显色剂称量