可送检的样品类型与对应检测项目
| 样品类型 | 典型应用场景 | 主要检测项目 | 常用方法 / 参考 |
|---|---|---|---|
| 生活饮用水（出厂水、管网末梢水、二次供水） | 城市供水系统卫生监测、供水企业过程控制、水质事件调查 | 贾第鞭毛虫孢囊计数（个/10L）、与隐孢子虫同步筛查 | GB/T 5750.12-2023 免疫磁珠分离-免疫荧光法；GB 5749-2022 限值小于1个/10L |
| 水源水（江河、湖库、水库、地下水） | 水厂选址与源水风险评估、水源地保护区例行监测 | 孢囊浓度水平、季节波动特征 | 大体积10~100L滤囊浓缩；GB/T 5750.12-2023 |
| 犬猫等伴侣动物粪便、肛拭 | 宠物健康体检、繁育与寄养场所筛查、引种检疫 | 粪抗原、孢囊镜检、基因分型 | 硫酸锌漂浮镜检；ELISA粪抗原；SSU rRNA、tpi、gdh基因巢式PCR |
| 实验动物（小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、兔） | SPF级动物质量监测、屏障设施验收、动物实验背景干扰排查 | 肠道鞭毛虫、纤毛虫、阿米巴等原虫携带状况 | GB/T 18448.10-2001；GB/T 18448.9-2001；GB 14922-2022 |
| 畜禽养殖粪便与污水（牛、羊、猪场） | 养殖场卫生学评估、粪污资源化利用前检测、人兽共患风险排查 | 孢囊浓度、人兽共患基因型鉴定 | 漂浮法浓集；巢式PCR分型assemblage A~H |
| 污水、再生水、游泳池水 | 再生水回用安全评估、场馆循环水卫生核查、污水处理工艺去除效率评价 | 孢囊计数、处理单元去除效率 | GB/T 5750.12-2023方法参照；膜过滤浓集 |
检测项目
1. 水样孢囊检测（免疫磁珠分离-免疫荧光法）：10L以上水样经1~3μm滤囊浓缩，GB 5749-2022限值小于1个/10L，定量范围1~10⁴个/10L
2. 粪便抗原检测（双抗体夹心ELISA）：450nm测读，灵敏度与特异度一般不低于90%，适合批量筛查
3. 核酸检测（巢式PCR/实时荧光PCR）：靶向SSU rRNA、tpi、gdh基因，扩增Ct≤38判阳性，可同步基因分型
4. 形态学检查（涂片染色/漂浮法）：孢囊8~12μm×7~10μm，卵圆形，囊壁光滑，碘液染色镜检
5. 基因分型（assemblage A~H）：A型与B型为人兽共患型，C型与D型见于犬科，F型见于猫科，E型见于偶蹄家畜，G型见于鼠类
6. 加标回收质控：每批样品插入10~50个孢囊加标对照，回收率控制在10%~100%通行质控区间
检测范围
1. 饮用水类：出厂水、管网末梢水、二次供水、包装饮用水源水
2. 天然水体：江河、湖泊、水库、地下水等水源水与地表水
3. 伴侣动物样本：犬、猫新鲜粪便与肛拭子
4. 实验动物：小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、兔等肠道原虫等级监测样本
5. 养殖与市政水样：牛羊猪场粪污、污水处理厂进出水、再生水、游泳池循环水
检测方法
1. GB/T 5750.12-2023 生活饮用水标准检验方法 第12部分：微生物指标（贾第鞭毛虫与隐孢子虫免疫磁珠分离-免疫荧光法）
2. GB 5749-2022 生活饮用水卫生标准（贾第鞭毛虫限值小于1个/10L）
3. GB/T 18448.10-2001 实验动物肠道鞭毛虫和纤毛虫检测方法
4. GB/T 35942-2018 隐孢子虫套式PCR检测方法（两虫同域分子方法参照）
5. GB 14922-2022 实验动物 微生物、寄生虫学等级及监测
6. GB/T 18448.9-2001 实验动物肠道溶组织内阿米巴检测方法（肠道原虫镜检方法参照）
检测设备
1. 荧光显微镜(Olympus BX53)：FITC激发490nm/发射520nm，配100×油镜，孢囊荧光确认与计数
2. 荧光显微镜(Nikon Eclipse Ni-E)：DAPI紫外激发330~385nm，200~630×复核孢囊细胞核
3. 免疫磁珠旋转混合器(Thermo Fisher Dynabeads配套混合器)：转速10~20rpm，磁珠与孢囊孵育结合
4. 磁分离架：适配1.5/2.0mL离心管，完成孢囊-磁珠复合物的磁场分选
5. 大容量冷冻离心机(Eppendorf 5810R)：4×1000mL转子，最大4000×g，控温-9~40℃，漂浮法浓集
6. 滤囊过滤装置(Pall Envirochek HV滤囊配蠕动泵)：处理10~100L水样，过滤流量1~2L/min
7. 实时荧光定量PCR仪(Bio-Rad CFX96)：96孔，FAM/VIC/ROX/Cy5四通道，控温范围4~100℃
8. 自动核酸提取仪(QIAGEN QIAcube)：磁珠法，单批24样本，洗脱体积50~200μL
9. 酶标仪(BioTek Synergy H1)：450nm/630nm双波长测读，ELISA粪抗原定性定量分析
10. 生物显微镜(ZEISS Axio Lab.A1)：40~1000×明场/相差观察，涂片形态学检查