检测项目

结合特性分析：

• 亲和力检测：平衡解离常数（KD值）、结合速率（Kon）、解离速率（Koff）（SPR技术参照ISO/TR 13014）
• 表位定位：氢氘交换质谱（HDX-MS）分辨率≤0.1Da
• 特异性验证：交叉反应率≤5%（流式细胞术）

• 细胞增殖抑制：半抑制浓度（IC50≤50nM）、最大抑制率（Emax≥95%）
• 信号通路阻断：磷酸化水平抑制率（Western Blot灰度分析）
• 效应功能：ADCC活性（LDH释放法效价≥80%）、CDC活性（补体C1q结合力）

• 有关物质：单杂≤0.5%，总杂≤1.5%（HPLC-UV法参照ChP2020）
• 聚集体分析：SEC-HPLC二聚体≤2.0%，HMW≤1.0%
• 电荷异质性：CE-SDS酸性峰/碱性峰比值0.8-1.2

• 一级结构：肽图覆盖率≥95%（LC-MS/MS）
• 高级结构：圆二色谱α-螺旋含量偏差≤5%，FTIR二级结构一致性≥90%
• 糖基化分析：岩藻糖基化率≤65%（HILIC-FLD）

• 体外代谢：CYP450酶抑制率（IC50≥10μM）
• 代谢产物：主要代谢物结构鉴定（HPLC-QTOF MS/MS）
• 血浆稳定性：37℃半衰期≥8h

• 靶点占位率：流式细胞术检测≥85%
• 内吞效率：pHrodo标记内吞率≥70%
• 受体下调：膜受体减少量≥50%（ELISA）

• 免疫原性：抗药抗体（ADA）检出限≤50ng/mL
• 细胞毒性：LD50≥100mg/kg（MTT法）
• 脱靶效应：激酶谱筛选选择性≥100倍

• 药物抗体比（DAR）：LC-MS测定值3.8-4.2
• 游离药物残留：≤0.05%（HPLC法）
• 粒径分布：脂质体Z-average 90-110nm（PDI≤0.2）

• 强制降解：高温（60℃/10天）总杂增加≤3%
• 光照试验：4500Lux条件下降解物≤0.2%
• 冻融循环：-80℃/25℃三轮活性保持≥95%

• 无菌检查：薄膜过滤法符合ChP1101
• 内毒素：鲎试剂LAL法≤5EU/mg
• 宿主蛋白残留：ELISA检测≤100ppm

检测范围

1. 单抗类药物： 抗HER2/EGFR/VEGF单抗，重点检测Fc段效应功能及糖基化修饰

2. 小分子激酶抑制剂： 酪氨酸激酶抑制剂（TKI）及SERD，侧重代谢产物鉴定及激酶选择性

3. ADC药物： 抗体-药物偶联物，核心检测DAR值、游离毒素及接头稳定性

4. 双特异性抗体： 靶向CD3/CD19等，验证双靶点协同作用及分子异质性

5. 核酸适配体： 检测血清稳定性（t1/2≥6h）及二级结构完整性

6. 脂质体载药系统： 阿霉素脂质体等，监控包封率（≥95%）及药物泄漏率

7. 多肽类药物： GLP-1类似物等，聚焦构象稳定性及酶切位点分析

8. 病毒载体药物： AAV载体基因治疗产品，测定病毒滴度（≥1E13vg/mL）及空壳率

9. 纳米抗体： VHH片段药物，评估热稳定性（Tm≥65℃）及组织穿透性

10. PROTAC分子： 靶向蛋白降解剂，检测三元复合物形成率及降解效率（DC50≤10nM）

检测方法

国际标准：

• USP<129> 液相色谱法测定抗体偶联比
• EP 2.7.24 细胞增殖抑制试验方法
• ISO 10993-5 医疗器械细胞毒性评价
• ICH Q2(R1) 分析方法验证指导原则

• ChP 2020 通则 1101 无菌检查法
• ChP 2020 通则 JianCe3 生物活性测定法
• GB/T 40149-2021 药物杂质谱分析技术指南

检测设备

1. 表面等离子共振仪： Biacore T200（检测范围1-106RU，温度控制±0.05℃）

2. 超高效液相色谱仪： Acquity UPLC H-Class（压力上限15000psi，柱温控制±0.5℃）

3. 三重四极杆质谱： QTRAP 6500+（质量精度<3ppm，扫描速度20000Da/s）

4. 流式细胞仪： CytoFLEX S（检测通道13个，灵敏度<50MESF）

5. 圆二色谱仪： Chirascan V100（波长范围165-1000nm，温控精度±0.1℃）

6. 微量热泳动仪： Monolith NT.Automated（样品量4μL，温度稳定性±0.1℃）

7. 激光粒度仪： Zetasizer Ultra（检测范围0.3nm-10μm，温控范围0-90℃）

8. 自动化电泳系统： LabChip GXII（样品通量96样/小时，CV≤5%）

9. 多功能酶标仪： SpectraMax i3x（检测模式12种，震荡强度0-1000rpm）

10. 等电聚焦电泳仪： iCE3 全柱成像系统（pH梯度3-10，分辨率±0.01pI）

11. 生物分子相互作用仪： Octet RED96e（检测速度30s/样，温控精度±0.1℃）

12. 冷冻电镜： Glacios Cryo-TEM（加速电压200kV，分辨率3.4Å）

13. 实时细胞分析仪： xCELLigence RTCA（检测频率1s-24h，阻抗检测范围0-30000Ω）

14. 全自动糖基化分析仪： GlycoWorks RapiFluor-MS（衍生效率≥98%，分析时间≤15min）

15. 差示扫描量热仪： MicroCal PEAQ-DSC（温度精度±0.1℃，热噪声<0.1μcal/s）