单克隆抗体表达测试

检测项目

表达效率测试：

• 表达量测定：细胞密度（1×10^6 cells/mL）、抗体浓度（范围50-500μg/mL，参照EP 2.6.14）
• 增殖速率：倍增时间（≤24小时）、存活率（≥95%）
• 代谢分析：葡萄糖消耗量（4-6g/L）、乳酸积累值（≤2g/L）

纯度分析：

• SDS-PAGE纯度：单体带纯度（≥95%）、片段含量（≤2%）
• SEC-HPLC检测：单体峰面积（≥98%）、聚集体比例（≤3%）
• CE-SDS分析：轻链/重链比率（1:1±0.1）、杂质峰（≤5%）

功能活性评估：

• 结合亲和力：KD值（≤1nM，参照ISO 10993-5）、EC50（≤10nM）
• 中和活性：IC50值（≤50ng/mL）、效价测定（≥90%）
• Fc功能：ADCC活性（≥80%）、CDC活性（≥75%）

特异性测试：

• 交叉反应分析：非特异性结合（≤5%）、交叉抗原识别（阴性）
• 抗原识别：表位定位精确度（偏差≤2Å）、多克隆对照（阴性）
• ELISA验证：信号/噪声比（≥10:1）、线性范围（R^2≥0.99）

稳定性测试：

• 热稳定性：Tm值（≥65°C）、聚集起始温度（≥60°C）
• 储存稳定性：降解率（≤5%/年，参照ICH Q1A）、冻融循环耐受（≤3次损失）
• pH稳定性：等电点（pI 6-9）、沉淀点（pH 3-10）

糖基化分析：

• N-糖谱：高甘露糖含量（≤10%）、半乳糖化率（≥80%）
• 唾液酸化：Neu5Ac浓度（5-15mol/mol）、岩藻糖化（≤5%）
• 糖型一致性：主峰比例（≥85%）、异构体偏差（±2%）

残留物检测：

• 宿主细胞蛋白：HCP残留（≤100ppm，参照EP 2.6.34）
• DNA残留：残留DNA（≤10ng/mg，参照ISO 11737-1）
• 内毒素：LAL法检测（≤0.1EU/mg，参照GB/T 14233.2）

结构表征：

• 质谱分析：分子量偏差（±50Da）、序列覆盖率（≥95%）
• 圆二色谱：二级结构比例（α-螺旋≥40%）、折叠稳定性（偏差≤2%）
• X射线晶体学：分辨率（≤2Å）、CDR区构象（RMSD≤1Å）

生物学安全性：

• 细胞毒性：活细胞率（≥90%，参照ISO 10993-5）
• 免疫原性：抗药抗体检测（阴性）、T细胞活化（≤5%）
• 无菌测试：微生物限度（无菌，参照EP 2.6.1）

工艺相关测试：

• 培养基残留：氨基酸残留（≤0.1%）、缓冲盐偏差（±5%）
• 纯化效率：回收率（≥80%）、亲和柱载量（≥20mg/mL）
• 病毒清除：log减少值（≥4log，参照ICH Q5A）

检测范围

1. CHO细胞表达抗体： 涵盖重组IgG1/IgG4亚型，重点检测表达稳定性和糖基化一致性，确保批次间变异≤5%

2. HEK293细胞表达抗体： 针对瞬时表达系统，侧重转染效率评估和瞬时产物纯度，检测HCP残留≤50ppm

3. 杂交瘤来源抗体： 适用于传统单抗生产，核心检测克隆稳定性及交叉反应性，验证特异性结合率≥95%

4. 酵母表达抗体： 聚焦Pichia pastoris系统，重点分析糖基化修饰异常和分泌效率，糖型一致性≥90%

5. 昆虫细胞表达抗体： 针对杆状病毒系统，检测表达水平波动和N-糖谱偏移，确保甘露糖含量≤15%

6. 哺乳动物悬浮培养抗体： 涵盖生物反应器工艺，侧重代谢副产物监控和细胞密度控制，乳酸积累≤1.5g/L

7. 固定化细胞培养抗体： 针对微载体系统，重点检测抗体收率和细胞贴附率，回收率≥85%

8. 无血清培养基抗体： 适用于高密度培养，核心分析残留牛血清蛋白和生长因子，HCP≤80ppm

9. 冻干制剂抗体： 针对固态产品，侧重复溶稳定性和水分含量，降解率≤2%/年

10. 液体制剂抗体： 涵盖缓冲液配方，重点检测聚集倾向和pH稳定性，单体含量≥97%

检测方法

国际标准：

• ISO 13485:2016 医疗器械质量管理体系（抗体生产全程控制）
• EP 2.6.14 单克隆抗体纯度测试（SEC-HPLC方法）
• ICH Q6B 生物技术产品质量规范（结构表征指南）
• USP <1045> 抗体效价测定（ELISA标准流程）
• ISO 10993-5 体外细胞毒性测试（MTT法）

国家标准：

• GB/T 16886.1-2022 医疗器械生物学评价（安全测试通则）
• GB/T 37864-2019 生物制品无菌检查法（膜过滤法）
• GB/T 39141.1-2020 重组蛋白纯度分析（电泳法）
• GB/T 14233.2-2021 医药制品内毒素测定（动态浊度法）
• GB/T 37865-2019 抗体结合活性检测（表面等离子共振）

（方法差异说明：EP标准SEC-HPLC使用TSKgel柱分辨率更高，GB/T 39141.1电泳法更侧重定性分析；ISO 10993-5细胞毒性测试要求72小时培养，GB/T 16886.1允许48小时简化流程；ICH Q6B指导稳定性测试温度范围更宽泛）

检测设备

1. 高效液相色谱仪： Agilent 1260 Infinity II型（流速精度±0.1%，检测波长范围190-800nm）

2. 酶标仪： BioTek Synergy H1型（检测灵敏度0.001OD，温控精度±0.1°C）

3. 质谱仪： Thermo Q Exactive HF-X型（质量精度<1ppm，分辨率>240,000）

4. 生物反应器： Sartorius BIOSTAT STR型（容量50L，DO控制精度±2%）

5. 流式细胞仪： BD FACSAria III型（检测速度>70,000细胞/秒，荧光通道≥18）

6. 圆二色谱仪： Jasco J-1500型（波长范围170-900nm，温度控制±0.1°C）

7. 毛细管电泳仪： Beckman PA 800型（电压范围0-30kV，分离效率>10^6 plates/m）

8. 微量紫外分光光度计： NanoDrop One型（样品量1μL，波长精度±1nm）

9. 动态光散射仪： Malvern Zetasizer Nano ZS型（粒径范围0.3nm-10μm，温度范围4-90°C）

10. 表面等离子共振仪： Biacore 8K型（结合速率检测限0.001RU，流通池温度±0.01°C）

11. 细胞计数器： Countstar IC1000型（计数精度±2%，荧光检测通道≥3）

12. 冷冻显微镜： Leica DMi8型（温度范围-196°C至150°C，成像分辨率≤0.2μm）

13. 恒温振荡器： Eppendorf Innova 44型（转速范围20-300rpm，温度精度±0.5°C）

14. 蛋白质纯化系统： ÄKTA pure 25型（流速范围0.001-100mL/min，压力上限5MPa）

15. 内毒素检测仪： Charles River Endosafe Nexgen型（检测范围0.001-500EU/mL，响应时间<15分钟）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"单克隆抗体表达测试"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。