生物制剂热稳定性测试

检测项目

物理稳定性检测：

• 热变性温度：Tm值（单位°C，参照DSC方法）
• 聚集分析：聚集体百分比（粒径分布范围，参照动态光散射标准）
• 浊度变化：NTU值（光散射强度≥0.5）

化学稳定性检测：

• 脱酰胺化率：百分比变化（HPLC测定精度±0.1%）
• 氧化程度：甲硫氨酸氧化比例（质谱检测限0.01%）
• 水解产物：降解片段浓度（SEC-HPLC分析）

生物活性检测：

• 酶活性保留率：百分比（ELISA检测灵敏度0.1ng/mL）
• 结合亲和力：KD值（单位nM，SPR测定）
• 细胞毒性：IC50值（MTT法测定）

结构完整性检测：

• 二级结构变化：α-螺旋含量（CD谱波长190-250nm）
• 三级结构变化：荧光发射峰位移（激发波长280nm）
• 折叠状态：热展开曲线斜率（DSC参数）

制剂兼容性检测：

• 缓冲液稳定性：pH偏移（范围±0.2）
• 赋形剂影响：聚集倾向指数（DLS测定）
• 离子强度效应：电导率变化（单位mS/cm）

加速稳定性检测：

• 40°C/75%RH稳定性：效价损失率（ICHQ1A指南）
• 热应力时间：降解动力学常数（Arrhenius方程）
• 湿度影响：水分吸附量（TGA测定）

长期稳定性检测：

• 2-8°C存储稳定性：效价保留（12个月周期）
• -20°C冷冻稳定性：复溶后活性（参照ICHQ1C）
• 实时老化：外观变化（目视检查标准）

冻融稳定性检测：

• 反复冻融循环：活性损失率（≥5次循环）
• 冰晶损伤：颗粒大小变化（Cryo-TEM分析）
• 冻融速率：降温曲线斜率（DSC参数）

光稳定性检测：

• 光照降解：光产物浓度（HPLC检测限0.05%）
• UV暴露稳定性：色度变化（CIELab*值）
• 辐照剂量：光强依赖性（ICHQ1B指南）

微生物稳定性检测：

• 无菌测试：CFU计数（膜过滤法精度99.9%）
• 内毒素水平：EU/mL（LAL法检测限0.001EU/mL）
• 生物负荷：微生物生长指数（ATP生物发光法）

检测范围

1.重组蛋白制剂：涵盖生长因子和细胞因子类，重点检测热诱导聚集和二级结构变化，确保效价稳定性。

2.单克隆抗体：包括IgG1和IgG4亚型，侧重Fc片段热变性及聚集分析，评估结合亲和力保留。

3.疫苗制剂：灭活病毒和mRNA疫苗类，检测热失活率及核酸降解，关注免疫原性变化。

4.基因治疗载体：AAV和慢病毒载体类，重点分析热应力下转导效率损失及衣壳完整性。

5.酶制剂：工业用蛋白酶和脂肪酶类，检测热失活动力学及活性位点稳定性。

6.诊断试剂：免疫检测抗体和抗原类，侧重热稳定性对检测灵敏度及特异性影响。

7.生物类似药：仿制单抗和融合蛋白类，与原研热稳定性对比，聚焦降解产物一致性。

8.细胞治疗产品：CAR-T和干细胞类，检测热应力下细胞活力及功能表型变化。

9.核酸药物：siRNA和反义寡核苷酸类，重点分析热降解片段及二级结构解折叠。

10.血浆制品：白蛋白和免疫球蛋白类，检测热沉淀倾向及胶体稳定性。

检测方法

国际标准：

• ICHQ1C稳定性测试：新原料药和制剂要求
• USP<1079>热分析应用：热力学参数测定
• ISO10993-5细胞毒性测试：体外方法
• EP2.2.2浊度测定：光散射标准

国家标准：

• 中国药典2020年版通则9001：药品稳定性试验指导原则
• GB/T16886.5-2017医疗器械生物学评价：细胞毒性试验
• GB/T5009.227-2016食品中蛋白质测定：HPLC方法
• YY/T0681.1-2020无菌医疗器械包装：加速老化试验

方法差异说明：国际标准ICHQ1C采用40°C/75%RH加速条件，而中国药典通则9001建议25°C/60%RH长期测试；USP<1079>热分析要求DSC升温速率2°C/min，GB/T标准则允许1-10°C/min范围；ISO10993-5细胞毒性测试使用MTT法，GB/T16886.5-2017等效但增加LDH释放指标；EP2.2.2浊度测定基于Nephelometric单位，YY/T标准采用类似但校准差异。

检测设备

1.差示扫描量热仪：TAInstrumentsQ2000（温度范围-150°Cto550°C，精度±0.1°C）

2.动态光散射仪：MalvernZetasizerNanoZS（粒径测量范围0.3nm-10μm，检测限0.1nm）

3.高效液相色谱仪：Agilent1260InfinityII（流速范围0.001-10mL/min，检测限0.1μg/mL）

4.圆二色谱仪：JascoJ-1500（波长范围190-900nm，分辨率0.1nm）

5.表面等离子共振仪：BiacoreT200（响应单位范围1-10000RU，精度±0.1RU）

6.酶标仪：BioTekSynergyH1（吸光度范围0-4OD，灵敏度0.001OD）

7.质谱仪：ThermoScientificOrbitrapExploris240（质量精度<1ppm，分辨率120,000）

8.荧光光谱仪：PerkinElmerLS55（激发波长200-800nm，发射波长200-900nm）

9.恒温恒湿箱：BinderKBF720（温度范围-10°Cto100°C，湿度范围10-98%RH）

10.冻融循环仪：JulaboF32（温度范围-40°Cto40°C，降温速率1°C/min）

11.光照老化箱：AtlasSuntestCPS+（辐照度765W/m²，波长范围300-800nm）

12.无菌测试设备：SartoriusMicrosart®（过滤孔径0.22μm，流量100mL/min）

13.生物反应器：SartoriusBIOSTAT®（pH控制范围2-12，DO控制0-100%）

14.电化学工作站：GamryInterface1010E（电位范围±10V，电流范围±2A）

15.紫外可见分光光度计：ShimadzuUV-2600i（波长范围190-1100nm，带宽1nm）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"生物制剂热稳定性测试"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。