EUGMP附录1无菌药品沉降菌要求测试

检测项目

采样点设置：

• 位置分布：关键操作点覆盖率≥95%（EUGMPAnnex1）
• 数量要求：每100m²设置≥10个点（ISO14698-1）
• 高度规范：工作平面高度80-150cm（偏差±5cm）

暴露时间控制：

• 标准时间：4小时（允许范围2-6小时）
• 动态调整：生产活动期间连续采样（EUGMPAnnex1）

培养基准备：

• 类型选择：大豆酪蛋白琼脂（TSA）或等效（ISO11133）
• 灭菌验证：121°C,15分钟（残存概率≤10^-6）
• 储存条件：2-8°C,≤30天（EUGMPAnnex1）

培养条件：

• 温度控制：30-35°C（波动±1°C）
• 培养时间：5-7天（ISO14698-1）
• 湿度要求：相对湿度≥90%（防止干燥）

微生物计数：

• 计数方法：菌落形成单位（cfu/皿）统计（ISO4833-1）
• 可接受限：A级区≤1cfu/4h（EUGMPAnnex1）
• 数据记录：自动计数器误差≤1%

微生物鉴定：

• 初步鉴定：革兰氏染色（阳性/阴性分类）
• 生化测试：API系统或等效（ISO20776-1）
• 分子鉴定：16SrRNA测序（准确度≥99%）

环境监控：

• 空气流速：≥0.45m/s（A级区）
• 粒子计数：≥0.5μm粒子≤3520/m³（ISO14644-1）

验证测试：

• 回收率验证：标准菌株接种回收率≥70%（USP<1223>）
• 阴性对照：无菌对照皿无生长（EUGMPAnnex1）

数据记录要求：

• 实时记录：采样时间、位置电子存档（可追溯性）
• 报告格式：符合EUGMP数据完整性要求

趋势分析：

• 统计方法：移动平均值计算（ISO7870-2）
• 警报限设置：基于历史数据±2SD

检测范围

1.A级洁净区：高风险无菌操作区如灌装线，重点检测沉降菌密度和微生物类型，确保≤1cfu/4h。

2.B级洁净区：背景支持区如更衣室，检测重点为沉降菌分布和趋势分析，可接受限≤5cfu/4h。

3.隔离器系统：封闭无菌环境，检测沉降菌采样点布局和培养验证，强调无微生物检出。

4.生物安全柜：实验室操作区，重点监控沉降菌暴露时间和培养基适用性，确保操作安全。

5.灭菌后区域：如灭菌隧道出口，检测沉降菌计数和鉴定，防止再污染。

6.包装区域：最终产品封装区，检测沉降菌环境监控和可接受限验证。

7.实验室环境：微生物检测室，重点为沉降菌采样频率和鉴定方法准确性。

8.仓库环境：无菌物料存储区，检测沉降菌趋势分析和报警限设置。

9.设备表面：接触点如传送带，间接沉降菌检测，强调采样高度规范。

10.人员操作区：如更衣缓冲区，检测沉降菌密度和人员活动影响。

检测方法

国际标准：

• ISO14698-1:2003Cleanroomsandassociatedcontrolledenvironments-Biocontaminationcontrol-Part1:Generalprinciplesandmethods
• EUGMPAnnex1:2022ManufactureofSterileMedicinalProducts

国家标准：

• GB/T16292-2010医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法
• ChP2020GeneralChapter9205EnvironmentalMonitoringofAsepticProcessingAreas

方法差异说明：ISO标准侧重采样频率通用性，而EUGMPAnnex1要求更严格的暴露时间（≥4小时）和可接受限；国家标准GB/T16292与ISO类似，但ChP整合了培养条件细节如温度控制范围。

检测设备

1.沉降菌采样器：MAS-100NT型（采样速率100L/min，精度±5%）

2.恒温培养箱：MemmertIN110型（温度范围20-60°C，波动±0.5°C）

3.菌落计数器：Scan®1200型（自动计数分辨率0.1mm，误差≤1%）

4.显微镜：OlympusBX53型（放大倍数40x-1000x，数字成像）

5.微生物鉴定系统：VITEK®2Compact型（鉴定速度≤8小时，准确度≥95%）

6.灭菌锅：Tuttnauer3870EA型（灭菌温度121-134°C，时间可调）

7.环境监控仪：Fluke985型（粒子计数范围0.3-10μm，数据记录容量1000点）

8.湿度控制器：VaisalaHMT330型（湿度范围0-100%RH，精度±1%）

9.培养基分配器：BioMerieuxPREVI®Isola型（分配精度±0.1mL，无菌保证）

10.数据记录系统：LIMS模块化系统（实时数据存储，可追溯性）

11.生物安全柜：ThermoScientific1300系列（风速≥0.5m/s，HEPA过滤）

12.恒温摇床：EppendorfInnova®42型（温度控制20-50°C，转速50-300rpm）

13.PCR仪：Bio-RadCFX96型（温度梯度±0.1°C，检测限10copies/μL）

14.电子天平：SartoriusCubis®型（称量范围0.1mg-200g，精度±0.001g）

15.洁净室验证仪：TSI9515型（空气流速测量0-30m/s，精度±2%）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

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