生物制药中细胞活性检测试验

检测项目

细胞活力检测：

• 存活率测定：活细胞比例≥95%（参照USP<107>）、台盼蓝阳性细胞≤3%
• 死亡细胞计数：坏死细胞百分比≤5%、LDH释放活性≤50U/L

• 倍增时间分析：细胞数量倍增时间24-48小时、EdU阳性细胞≥70%
• DNA合成检测：S期细胞比例20-30%（参照ISO10993-5）

• 早期凋亡评价：AnnexinV+/PI-细胞≤10%、Caspase-3活性≤5U/mg
• 晚期凋亡监测：AnnexinV+/PI+细胞≤5%、核碎片化评分≤1级

• 周期分布检测：G1期比例50-70%、S期比例20-30%
• G2/M期评估：比例10-20%、有丝分裂指数≥5%

• ATP含量测定：相对荧光单位RLU≥10000、葡萄糖消耗率≤2g/L/h
• 氧化磷酸化评价：氧消耗速率≥50pmol/min、乳酸生成≤10mM

• 渗透性分析：PI阳性细胞≤3%、钙黄绿素释放荧光变化≤20%
• 膜电位监测：DiOC6染色荧光强度≥80%

• ROS水平评估：相对荧光单位RLU≤100、超氧化物歧化酶活性≥10U/mg
• 抗氧化能力：谷胱甘肽含量≥10μmol/g蛋白、过氧化氢酶活性≥5U/mg

• 凋亡基因检测：Bcl-2/Bax比值≥1.5（qPCRCt值）、p53表达量≤2倍
• 功能基因监测：CD标记阳性率≥90%、转染效率≥80%

• 分泌能力评价：IL-6浓度≤50pg/mL、抗体滴度≥1:1000
• 结合活性测试：流式MFI≥1000、特异性结合率≥90%

• 细胞形态评估：正常纺锤形比例≥90%、空泡化评分≤1级
• 聚集分析：细胞团块直径≤50μm、贴壁率≥95%

检测范围

1.哺乳动物细胞培养物：CHO和HEK293细胞悬浮液，重点检测存活率、增殖能力和代谢活性，确保无污染。

2.干细胞治疗产品：间充质干细胞制剂，侧重凋亡比例、分化潜能和基因稳定性，验证治疗安全性。

3.单克隆抗体生产细胞：杂交瘤细胞系，监测抗体分泌量、细胞周期分布和膜完整性，优化生产流程。

4.病毒载体生产细胞：HEK293感染样本，检测感染效率、病毒滴度和细胞死亡率，保证载体质量。

5.细胞治疗产品：CAR-T细胞悬浮液，评估杀伤活性、功能基因表达和氧化应激水平，符合临床标准。

6.生物反应器培养样本：发酵液细胞，关注密度变化、ATP含量和形态稳定性，控制规模化生产。

7.冷冻复苏细胞：液氮冻存后细胞，验证复苏率、膜完整性和功能活性，确保储存可靠性。

8.转基因细胞系：基因编辑细胞，检测编辑效率、表型一致性和凋亡指数，支持精准医疗。

9.微生物污染检测样本：培养基样本，排除细菌、真菌污染，重点监测无菌性和细胞健康。

10.生物制药中间体：纯化前细胞悬液，确保无碎片、活性损失≤5%，侧重代谢和形态分析。

检测方法

国际标准：

• ISO10993-5:2009医疗器械体外细胞毒性试验方法
• ASTME2526-08流式细胞术凋亡检测标准方法
• USP<107>细胞存活率测定规范

• GB/T16886.5-2017医疗器械生物学评价细胞毒性试验
• GB/T39126-2020细胞治疗产品活性检测通用要求
• YY/T0993-2015细胞培养技术指南

检测设备

1.流式细胞仪：BDFACSCantoII（分辨率CV≤2%，荧光通道8个）

2.倒置显微镜：OlympusIX73（放大倍数40-400x，相机分辨率5MP）

3.微孔板阅读器：BioTekSynergyH1（波长范围200-1000nm，精度±1%）

4.自动细胞计数器：InvitrogenCountessII（计数范围1x10^4-1x10^7/mL）

5.实时荧光定量PCR仪：AppliedBiosystems7500（检测通道5个，动态范围10^7）

6.高速离心机：Eppendorf5430R（最大转速15000rpm，容量4x100mL）

7.CO2培养箱：ThermoScientificHeracell150i（温度精度±0.1°C，CO2控制0.1-20%）

8.液氮存储罐：ChartMVESC4/3V（容量350L，保存温度-196°C）

9.生物安全柜：ESCOAirstreamAC2-4S1（气流流速0.4m/s，HEPA过滤99.99%）

10.紫外分光光度计：ThermoScientificNanoDropOne（样品体积1μL，波长190-850nm）

11.细胞培养摇床：INFORSHTMinitron（转速20-300rpm，容量2L）

12.流式分选仪：BDFACSAriaIII（分选速度70000细胞/秒）

13.ELISA阅读器：MolecularDevicesSpectraMaxi3x（检测模式：荧光、发光）

14.细胞成像系统：GEHealthcareINCellAnalyzer6000（高通量成像≥100孔/小时）

15.生化分析仪：RocheCobasc501（测试项目包括LDH、ATP）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"生物制药中细胞活性检测试验"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。