冠瘿病检测

检测项目

1.病原菌分离鉴定：采用选择性培养基（如YEB培养基）进行菌落培养，观察菌体形态（杆状、0.6-1.01.5-3.0μm）、革兰氏染色反应（阴性）及生理生化特性（28℃需氧生长）

2.Ti质粒基因检测：通过PCR扩增virD2基因（引物序列：virD2-F:5'-GCTCAAGTCGAGCGAGC-3'；virD2-R:5'-GCGTATCACGAGGCCAG-3'），扩增产物预期长度680bp

3.肿瘤组织病理分析：石蜡切片制备（厚度8-10μm），HE染色观察异常增生细胞结构（导管分化异常率≥75%）

4.冠瘿碱代谢产物检测：采用HPLC法测定章鱼碱（保留时间6.8min）或胭脂碱（保留时间9.2min），流动相为乙腈-水（70:30）

5.寄主抗性基因筛查：qRT-PCR定量分析NPR1基因表达量（Ct值≤28判定为阳性）

检测范围

1.蔷薇科果树苗木：苹果/梨/桃嫁接苗接口部位（取样量≥5g）

2.核果类经济作物：樱桃/杏树根部瘤状突起组织（直径＞3mm样本）

3.观赏园艺植物：月季/菊花茎基部增生组织（发病期样本）

4.林木种质资源：杨树/柳树根颈部肿大部位（木质化程度＞Ⅱ级）

5.组培污染鉴定：植物细胞悬浮培养物中Ti质粒残留检测（OD600≥0.3）

检测方法

ISO13307:2013《植物病原细菌分离培养技术规范》第4.2章菌落特征判定标准

GB/T28068-2011《植物病原细菌实时荧光PCR检测方法》中根癌农杆菌特异性引物设计

ASTMD7464-08(2019)《植物肿瘤组织显微分析标准指南》石蜡切片制备流程

ISO16140-3:2021《分子生物学方法验证规程》qPCR扩增效率验证要求（斜率-3.1~-3.6）

GB/T36862-2018《植物病原菌Ti质粒检测技术规范》冠瘿碱HPLC测定条件设置

检测设备

ThermoFisherQuantStudio5实时荧光定量PCR仪：支持TaqMan探针法进行vir基因定量分析

Agilent1260InfinityII高效液相色谱系统：配备DAD检测器（波长214nm）用于冠瘿碱分离测定

LeicaRM2245半自动切片机：提供8-40μm连续石蜡切片制备功能

OlympusBX53荧光显微镜：配置DP80双CCD相机进行肿瘤组织病理成像

Bio-RadCFX96Touch深孔板qPCR仪：支持96孔板高通量病原基因筛查

SartoriusME36S百万分之一天平：满足微量样本称量精度（0.001mg）要求

MemmertINCO108细胞培养箱：提供精确温控（0.3℃）的细菌培养环境

Eppendorf5430R高速冷冻离心机：最大转速30,000rpm用于核酸快速沉淀

Agilent2100Bioanalyzer生物分析仪：进行DNA/RNA完整性评估（RIN值≥7.0）

ThermoScientificHeratherm微生物培养箱：满足28℃0.5℃的根癌农杆菌培养条件

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"冠瘿病检测"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检检测技术研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。