检测项目

1.序列完整性分析：采用Agilent2100生物分析仪检测RNA完整性数值（RIN≥7.0），片段分布范围200-6000nt

2.表达水平定量：基于RT-qPCR的绝对定量（Ct值0.5），动态范围10^1-10^8copies/μL

3.剪接变异体鉴定：IlluminaNovaSeq6000平台进行150bp双端测序，覆盖深度≥30

4.多聚腺苷酸化位点定位：PacBioSequelII系统进行全长转录本测序（准确度≥Q30）

5.融合转录本筛查：ArcherFusionPlexPanel捕获建库（灵敏度0.1%VAF）

检测范围

1.哺乳动物细胞系（HEK293、HeLa等）培养物提取的总RNA

2.临床组织样本（福尔马林固定石蜡包埋组织）的微量RNA

3.外周血单个核细胞（PBMC）分离的循环RNA

4.植物组织（拟南芥叶片）低温保存样本

5.微生物群落（土壤/肠道宏转录组）复杂样本

检测方法

ISO20184-1:2019《分子体外诊断检验-冷冻组织标本中RNA的分离纯化》

ASTME3133-18《核酸测序数据质量评估标准指南》

GB/T34796-2017《核酸定量测定用物质的量浓度标准物质》

ISO20395-2019《生物技术-核酸靶序列定量方法的验证要求》

GB/T37872-2019《高通量基因测序数据质量要求》

检测设备

ThermoFisherQuantStudio6Pro：实时荧光定量PCR系统（温度均一性0.25℃）

Agilent4200TapeStation：自动化电泳系统（灵敏度1pg/μLRNA）

IlluminaNovaSeq6000：高通量测序平台（单次运行输出6Tb数据）

NanoporeGridIONX5：长读长测序设备（读长≥4Mb）

BeckmanCoulterBiomeki7：自动化液体处理工作站（移液精度1%）

QiagenQIAcubeConnect：核酸纯化系统（最大通量12样本/批次）

SartoriusCubisIIMSA：微量天平（分辨率0.1μg）

EppendorfMastercyclerX50：梯度PCR仪（升降温速率6℃/s）

Bio-RadCFXOpus96：实时定量PCR系统（多色荧光检测通道）

CovarisM220：聚焦式超声破碎仪（DNA片段化精度50bp）