插入位点检测

检测项目

1.插入位点序列分析：覆盖500bp侧翼区域碱基对数目≥99%，同源性匹配率≥98%

2.拷贝数定量检测：灵敏度达0.1拷贝/细胞级，动态范围10^1-10^6

3.整合方向验证：双酶切位点验证准确率≥99.9%

4.甲基化状态分析：CpG岛覆盖率≥95%，分辨率达单碱基水平

5.表达稳定性测试：连续传代20次后表达量波动≤5%

检测范围

1.转基因作物：水稻Os基因座、玉米ZmGos2启动子区等

2.重组蛋白药物：CHO细胞GS基因座、HEK293细胞AAVS1位点

3.基因编辑细胞系：CRISPR/Cas9介导的HBB、CCR5等靶点

4.功能化纳米材料：金纳米颗粒表面配体接枝位点

5.生物传感器：荧光报告基因插入rRNA操纵子区

检测方法

1.反向PCR扩增（GB/T38569-2020）结合IlluminaMiSeq测序

2.数字PCR定量（ISO20395:2019）使用Bio-RadQX200系统

3.Southernblot杂交（GB/T19495.4-2018）采用DIG标记探针

4.全基因组重测序（ASTME3136-18）平均深度≥30

5.Hi-C染色体构象捕获（ISO/TS20914:2019）分辨率达10kb

检测设备

1.IlluminaNovaSeq6000：高通量双通道测序仪，通量6Tb/run

2.ThermoFisherQuantStudio7Pro：96孔实时定量PCR系统

3.Agilent4200TapeStation：DNA完整性检测（DIN≥7.0）

4.BeckmanCoulterCytoFLEXS：流式细胞分选仪（488/640nm双激光）

5.OxfordNanoporeGridIONX5：长读长测序（N50＞20kb）

6.CovarisM220：超声破碎仪（DNA片段化150-800bp）

7.BioNanoSaphyr：光学图谱系统（DNA分子长度＞250kb）

8.PerkinElmerLabChipGXTouch：核酸定量精度5%

9.RocheLightCycler480II：多重PCR扩增效率＞90%

10.PacBioSequelIIe：HiFireads准确率Q30＞99.9%