可送检的样品类型与对应检测项目

样品类型 典型应用场景 主要检测项目 常用方法 / 参考
玻璃酸酶原料药（动物源） 自牛、羊睾丸提取的生化原料药，供注射剂生产与出口贸易 效价、比活性、蛋白含量、水分、pH、纯度、炽灼残渣 《中国药典》2020年版二部玻璃酸酶各论收载的效价测定法（浊度法）
注射用玻璃酸酶制剂 冻干粉针剂的放行检验与稳定性考察 效价按标示量折算、干燥失重、复溶时间、可见异物、酸度 《中国药典》2020年版二部制剂各论与通则要求
重组透明质酸酶原液 基因工程表达、纯化工艺开发与批次放行 比活性、SEC-HPLC纯度、SDS-PAGE、等电点、米氏常数Km与最大反应速率Vmax 分子排阻色谱与分光光度法组合
生化试剂级工具酶 糖生物学研究、组织分散与透明质酸降解实验用酶产品质控 活性单位、蛋白含量、内毒素、缓冲液组分确认 分光光度法与细菌内毒素检查法
酶抑制与降解研究样品 化妆品功效评价、酶抑制剂药物筛选反应体系 底物降解速率、抑制率、动力学参数、时间进程曲线 分光光度法与粘度法
交联透明质酸钠凝胶降解评价样品 医用填充剂体外酶降解行为研究 降解失重率、降解产物分子量分布变化、流变特性演变 SEC-HPLC结合流变学方法
粗酶液与表达上清 工程菌或工程细胞表达水平监测与诱导条件优化 相对活性、比活性粗测、表达量趋势比较 96孔板微量浊度法

检测项目

1. 效价测定：浊度法，37℃酶解底物后酸性蛋白显浊，585nm比浊定量，结果以单位每毫克计，制剂按标示量折算评估

2. 比活性：效价与蛋白含量之比，以单位每毫克蛋白计，反映酶制剂纯度与质量一致性

3. 蛋白含量：BCA法或Lowry法，测定范围0.02-2mg/mL，配套标准曲线定量

4. 纯度分析：SDS-PAGE主条带与SEC-HPLC主峰面积占比通常要求大于95%，同时评估聚集状态

5. 酶动力学参数：米氏常数Km与最大反应速率Vmax，底物浓度梯度0.01-0.5mg/mL，Lineweaver-Burk双倒数拟合

6. 热稳定性：37℃加速放置后残余活性百分比跟踪，评估储存与运输条件适用性

检测范围

1. 动物源玻璃酸酶原料药：牛源、羊源睾丸提取的冻干粉与精制品

2. 注射用玻璃酸酶制剂：无菌冻干粉针剂与注射用无菌粉末

3. 重组透明质酸酶：rhPH20类工程酶表达原液、纯化中间体与成品

4. 工具酶产品：生化试剂级透明质酸酶干粉与含甘油酶液

5. 科研样品：表达上清、粗酶液、纯化组分与酶反应体系样品

检测方法

1. 《中国药典》2020年版二部 玻璃酸酶各论收载的效价测定法（浊度法）

2. 《美国药典》USP-NF 2025 透明质酸酶各论含量测定方法

3. 《欧洲药典》11.0 透明质酸酶各论方法

4. 分光光度法（Morgan-Elson反应）：测定酶解产物N-乙酰氨基葡萄糖还原端，585nm比色定量

5. SEC-HPLC法：分子排阻色谱测定酶纯度、聚集体与降解产物分子量分布

6. 粘度法：乌氏粘度计跟踪底物特性粘度下降速率，间接表征酶活性

检测设备

1. 紫外可见分光光度计（UV-2600i）：波长范围190-1100nm，光谱带宽1nm，支持37℃控温比色

2. 多功能酶标仪（Varioskan LUX）：波长范围200-1000nm，温控20-45℃，支持96孔板终点法与动力学读取

3. 高效液相色谱仪（LC-20A系列）：配分子排阻色谱柱与示差折光检测器，分离范围覆盖酶蛋白与多糖片段

4. 恒温水浴锅：温度范围室温至100℃，控温精度±0.1℃，保障反应温度一致

5. 垂直电泳系统：SDS-PAGE凝胶浓度8%-12%，配套凝胶成像与灰度分析

6. 分析天平：可读性0.01mg，用于对照品与供试品精密称量

7. 高速冷冻离心机：最大转速15000rpm，温控4℃，用于酶液澄清处理

8. pH计：测量范围0-14，精度0.001pH，用于缓冲液体系校准

9. 涡旋混匀器：转速500-3000rpm，定时混匀底物与酶液

10. 超低温冰箱：箱温-86℃，用于对照品、底物与酶样品长期保存