荧光定量PCR测试

检测项目

病原体定量检测：

• 病毒载量检测：Ct值（范围15-40）、扩增效率（Eff%≥95%，参照ISO22174:2021）
• 细菌计数：检测限（LOD≤100CFU/mL）、特异性（交叉反应≤1%）
• 寄生虫DNA分析：阈值循环变异系数（CV%≤2.5%）

基因表达分析：

• mRNA相对定量：ΔCt值（精度±0.2Ct）、内参基因稳定性（M值≤0.5）
• 差异表达检测：折叠变化（FoldChange≥2）、扩增曲线线性度（R²≥0.99）

转基因成分检测：

• 外源基因筛查：检测限（LOD≤0.1%）、特异性（无假阳性）
• 品系特异性分析：熔解温度（Tm±1.0°C）、扩增效率（Eff%≥85%）

微生物负载测试：

• 总菌群计数：定量限（LOQ≤50拷贝）、扩增斜率（标准值≥0.85）
• 真菌DNA定量：Ct值变异范围（±1.0Ct）、特异性（引物特异性≥98%）

病毒载量监测：

• HIVRNA检测：动态范围（10²-10⁸IU/mL）、扩增效率（Eff%≥90%）
• 流感病毒分型：熔解曲线峰宽（≤1.5°C）、Ct值精度（CV%≤3.0%）

SNP分型分析：

• 单核苷酸多态性检测：等位基因判别（ΔTm≥2.5°C）、特异性（非特异性扩增≤5%）
• 基因型频率：扩增效率（Eff%≥88%）、检测限（LOD≤5%）

融合基因检测：

• 染色体易位分析：Ct值阈值（≤35）、扩增曲线形状（斜率≥0.8）
• 突变位点定量：定量限（LOQ≤1%）、熔解温度一致性（Tm±0.5°C）

miRNA定量：

• 小RNA表达：检测限（LOD≤0.1fM）、扩增效率（Eff%≥92%）
• 靶基因关联分析：ΔCt值稳定性（SD≤0.3）、特异性（茎环引物效率≥95%）

CNV检测：

• 拷贝数变异分析：相对定量（ΔΔCt法精度±0.1）、扩增曲线平台值（荧光强度≥5000RFU）
• 基因组失衡：检测限（LOD≤0.5倍）、特异性（无背景噪声）

食品安全病原体检测：

• 食源性细菌筛查：Ct值范围（20-38）、扩增效率（Eff%≥85%）
• 毒素基因定量：阈值循环重复性（CV%≤2.0%）、熔解曲线分辨率（峰高≥100）

检测范围

1.血液样本：涵盖全血或血清，重点检测病毒载量（如HJianCe/HCV）和循环肿瘤DNA（ctDNA）突变定量

2.组织样本：包括肿瘤组织或病理切片，侧重基因表达差异分析（如癌基因转录水平）和融合基因筛查

3.环境样本：如水质或空气颗粒物，重点微生物污染定量（如大肠杆菌浓度）和病原体分布监测

4.食品样本：涵盖肉类、果蔬及乳制品，侧重食源性病原体检测（如沙门氏菌DNA）和转基因成分筛查

5.植物样本：包括种子或叶片，重点转基因品系鉴定（如抗虫基因）和病原真菌负载分析

6.细胞培养物：如贴壁或悬浮细胞，侧重基因编辑效率（如CRISPR-Cas9）和miRNA表达动态

7.法医样本：包括毛发或唾液，重点人类DNA定量（如STR分型）和降解样本Ct值校正

8.药品试剂：涵盖疫苗或生物制品，侧重残留宿主DNA检测（如≤100pg/dose）和工艺相关杂质定量

9.空气样本：如气溶胶或沉降物，重点空气传播病原体（如SARS-CoV-2RNA）和微生物群落分析

10.土壤样本：涵盖农田或污染土壤，侧重微生物多样性（如16SrRNA基因）和抗生素抗性基因定量

检测方法

国际标准：

• ISO22174:2021分子生物学方法检测食源性病原体核酸
• ISO17822:2020体外诊断检测感染性疾病核酸扩增
• ISO20395:2019生物技术核酸定量性能要求

国家标准：

• GB/T19495.5-2018转基因产品检测核酸定量PCR方法
• GB/T37873-2019病毒核酸检测实时荧光PCR法
• GB/T40936-2021病原微生物核酸扩增检测技术规范

方法差异说明：国际标准（如ISO22174）更侧重样品前处理通用性，允许宽泛模板浓度；而国家标准（如GB/T19495.5）严格要求内参基因校准，针对特定阈值设定Ct值范围更窄，并规范扩增曲线验证步骤。

检测设备

1.实时荧光定量PCR分析仪：Bio-RadCFX96Touch（检测通道：6色，温度精度±0.1°C）

2.高通量qPCR系统：ThermoFisherQuantStudio7Pro（通量：384孔，动态范围达10⁹）

3.便携式PCR仪：RocheLightCycler96（升温速率：4.8°C/s，荧光检测灵敏度≤0.1RFU）

4.多重检测平台：QiagenRotor-GeneQ（通道数：4个，熔解曲线分辨率≤0.1°C）

5.自动化qPCR工作站：AgilentAriaMx（通量：96孔，自动加样精度±1%）

6.微流体PCR系统：FluidigmBiomarkHD（芯片容量：96×96，检测限≤5拷贝）

7.数字PCR仪器：Bio-RadQX200DropletDigitalPCR（分区数：20,000滴，绝对定量精度±5%）

8.紧凑型检测仪：EppendorfMastercyclereprealplex（温度均一性±0.3°C，运行时间≤40min）

9.高速扩增设备：BioerLineGene9600（循环时间≤30s/cycle，荧光采集速率50ms）

10.低容量反应系统：AnalytikJenaqTOWER3G（反应体积：5-20μL，温控精度±0.2°C）

11.多模式检测仪：TakaraTP800（支持SYBRGreen/TaqMan，通道兼容性：4个）

12.温度梯度PCR仪：BJSBiotechnologiesESCO（梯度范围：30-100°C，精度±0.1°C）

13.环境监测专用仪：LongGeneLG-9600（防尘设计，温度稳定性±0.5°C）

14.高灵敏度系统：AidlabExicycler96（荧光检测范围：350-700nm，灵敏度≤0.05RFU）

15.经济型qPCR设备：HercuvanH9600（基本参数：96孔，精度±0.5°C）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"荧光定量PCR测试"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。