可送检的样品类型与对应检测项目
| 样品类型 | 典型应用场景 | 主要检测项目 | 常用方法 / 参考 |
|---|---|---|---|
| 瓶内脱毒组培苗（茎尖培养成苗） | 组培室扩繁、脱毒核心种源培育 | 花叶病毒、黄叶病毒、条纹花叶病毒、杆状病毒带毒率，宿根矮化病菌，培养污染率 | NY/T 3179-2018检测技术规范；GB/T 36806-2018；GB/T 28067-2011 |
| 假植驯化袋装苗与营养杯苗 | 苗圃假植、大田移栽前出圃检验 | 苗高、假茎粗、绿叶数、根系发育、批次带毒率抽检 | NY/T 1796-2009质量指标与检验方法 |
| 脱毒健康种茎（一代、二代种茎） | 蔗区良种繁育基地扩繁 | 芽健壮度、含水量、宿根矮化病菌、批次带毒率 | GB/T 36829-2018实时荧光PCR；NY/T 3172-2017分级要求 |
| 原原种与基础种苗 | 脱毒苗核心保纯、种源基地留种 | 目标病原零带毒复核、品种真实性、遗传一致性 | SSR分子标记；NY/T 3172-2017种源分级 |
| 调运批次种苗 | 省际调运、基地间种苗流转交接 | 线条病毒检疫鉴定、带毒率复核、苗体合格率 | GB/T 33127-2016检疫鉴定方法 |
| 大田定植苗与示范苗 | 生产基地验收、品种抗性跟踪 | 黑穗病抗性鉴定、苗势整齐度、带毒率回访 | GB/T 35874-2018抗性鉴定技术规程 |
检测项目
1. 甘蔗花叶病毒（SCMV）带毒率：DAS-ELISA初筛（OD值达阴性对照2~3倍判阳），RT-PCR条带确认，原原种要求目标病原零携带
2. 甘蔗黄叶病毒（SCYLV）检测：实时荧光RT-PCR定量，取新展叶中脉韧皮部，Ct值阈值法判定
3. 宿根矮化病菌（Lxx）检测：成熟节间榨汁液实时荧光PCR，Ct值35以内典型判阳
4. 苗体质量分级：苗高20~35cm、假茎粗0.5~1.0cm、绿叶数5~8片、根数5~15条（袋装苗出圃典型口径）
5. 品种真实性与纯度：SSR分子标记位点一致性比对，批次品种纯度不低于95%（典型生产口径）
6. 黑穗病抗性配套鉴定：人工接种测定侵染率，按高抗至高感五级评价
检测范围
1. 甘蔗脱毒组培瓶苗：ROC22（新台糖22号）、桂糖42号、云蔗08/1609等主栽品种
2. 假植袋装苗与营养杯苗：单芽苗、双芽苗规格
3. 脱毒健康种茎：一代种茎、二代种茎
4. 原原种与基础种苗：茎尖培养脱毒苗、继代培养物
5. 调运与展示批次种苗：省际调运苗、基地流转苗、展示示范苗
检测方法
1. NY/T 3179-2018 甘蔗脱毒种苗检测技术规范
2. NY/T 1796-2009 甘蔗种苗 质量指标与检验方法
3. NY/T 1804-2009 甘蔗花叶病毒检测技术规范（DAS-ELISA与RT-PCR）
4. GB/T 36806-2018 甘蔗杆状病毒实时荧光PCR检测方法
5. GB/T 36820-2018 甘蔗条纹花叶病毒实时荧光RT-PCR检测方法
6. GB/T 36829-2018 甘蔗宿根矮化病菌实时荧光PCR检测方法
7. GB/T 28067-2011 甘蔗黄叶病毒实时荧光RT-PCR检测方法
8. GB/T 33127-2016 甘蔗线条病毒检疫鉴定方法
检测设备
1. 实时荧光定量PCR仪：96孔，4~6色荧光通道，温控精度±0.1℃，升降温速率最高5℃/s
2. 梯度PCR仪：温控范围4~99℃，精度±0.2℃，梯度宽度24℃以上
3. 酶标仪：波长范围400~750nm，配405/450/630nm滤光片，吸光度范围0~4.0A
4. 凝胶成像分析系统：CCD分辨率500万像素以上，紫外与蓝光双光源
5. 水平电泳系统：输出电压50~300V，电流1~400mA，琼脂糖凝胶核酸分离
6. 光照培养箱：温度4~45℃，湿度50%~90%RH，光照0~30000lx
7. 超净工作台：洁净度ISO 5级，工作区风速0.3~0.5m/s
8. 立式压力蒸汽灭菌器：温度105~135℃，工作压力约0.15MPa
9. 生物显微镜：放大倍数40~1000倍，明场与相差观察
10. 电子天平：读数精度0.1mg，量程0~220g