检测项目

感染性滴度检测：

• 空斑形成试验（Plaque Assay）：空斑形成单位（PFU/mL），检测限≥50 PFU/mL（参照CP/USP<71>）
• 终点稀释法（TCID50）：半数组织培养感染剂量（log10 TCID50/mL），置信区间95%
• 荧光灶试验（FFA）：荧光灶形成单位（FFU/mL），最小计数单元≥5个细胞灶

• qPCR定量：基因组拷贝数（GC/mL），引物效率90%-110%（参照ISO 15194）
• ddPCR定量：绝对拷贝数（copies/μL），检测限≤10 copies/反应
• Sanger测序验证：靶序列一致性≥99.9%（参考GenBank序列）

• 透射电镜计数：病毒颗粒总数（VP/mL），染色对比度≥0.1 OD
• 纳米颗粒追踪分析（NTA）：粒径分布（nm），浓度范围10^7-10^9 VP/mL
• 紫外分光光度法：A260/A280比值（1.65±0.05），病毒颗粒估算（VP= A260×稀释因子×1.1×10^12）

• 宿主细胞DNA残留：≤10 ng/剂量（参照ICH Q5A）
• 宿主细胞蛋白残留：≤50 ppm（ELISA法）
• 内毒素检测：≤5 EU/mL（LAL法，USP<85>）

• 酶联免疫吸附（ELISA）：完整衣壳比率（%），包被抗体结合效率≥95%
• 分析型超速离心（AUC）：空壳率（%），分辨率0.1 Svedberg单位
• 毛细管电泳（CE-SDS）：衣壳蛋白纯度（≥98%）

• 复制能力试验（RCL/RCA）：0检出/3×10^10 VP（参照FDA CBER指南）
• qPCR法：rep/cap基因拷贝比≤1:1000

• 流式细胞术：转导单位（TU/mL），阳性对照≥70%表达率
• Western Blot：目标蛋白表达量（ng/mL），内参β-actin校准

• 加速稳定性：-80℃/25℃/37℃存储，滴度衰减≤0.5 log（ICH Q1A）
• 反复冻融试验：≥3次循环后活性保留≥80%

• 中和抗体检测：血清中和效价（ID50），细胞病变抑制率≥90%
• ELISpot：IFN-γ斑点数/10^6细胞，空白对照≤5 spots

• 质粒DNA残留：≤100 pg/剂量（探针杂交法）
• 血清蛋白残留：≤1 μg/mL（SDS-PAGE银染）

检测范围

1. 腺相关病毒载体（AAV）： 涵盖血清型AAV1-AAV9及嵌合体，重点检测空壳率（≤20%）及rcAAV残留

2. 慢病毒载体（LV）： 包括自失活（SIN）及非SIN型，侧重RCL筛查及基因组完整性

3. 腺病毒载体（AdV）： E1/E3缺失型复制缺陷病毒，核心检测复制能力及热稳定性

4. 逆转录病毒载体（RV）： 伽马逆转录病毒为主，强制检测插入突变风险及载体滴度

5. 溶瘤病毒制剂： HSV-1/痘苗病毒等，关键项为肿瘤选择性复制指数（≥1000）

6. 病毒疫苗原液： 流感/狂犬病疫苗等，强制检测感染性滴度（CCID50）及血凝素含量

7. 病毒灭活验证样本： β-丙内酯/甲醛处理品，残留感染性需≤1 log TCID50/mL

8. 基因治疗制品： CAR-T用病毒载体，重点分析转导效率（≥30%）及载体拷贝数（VCN≤5）

9. 病毒样颗粒（VLP）： HPV/HJianCe等VLP，核心检测组装完整性（电镜）及抗原表位保有率

10. 细胞库病毒种子： MCB/WCB级别，强制进行外源病毒因子检测（9 CFR §113.53）

检测方法

国际标准：

• ISO 15194:2009 体外诊断医疗器械-生物源性样品中量的测量-参考测量程序的表述
• USP <1050> Viral Safety Evaluation of Biotechnology Products
• EMEA/CHMP/BWP/4986/03 基因治疗载体质量规范
• ICH Q5A(R1) 来源于人或动物细胞系生物技术产品的病毒安全性评价
• ASTM E2888-12 流式细胞术测定慢病毒载体滴度标准方法

• YY/T 1183-2021 病毒空斑测定方法
• 《中华人民共和国药典》2020年版 三部 生物制品病毒安全性控制
• GB/T 40982-2021 病毒载体滴测定 实时荧光定量PCR法
• YY/T 1595-2017 腺相关病毒载体生物学活性测定
• GB/T 38735-2020 质粒DNA残留量测定 荧光探针法

检测设备

1. 实时荧光定量PCR仪： QuantStudio 7 Pro（检测通道：6色，灵敏度：1拷贝/反应）

2. 数字PCR系统： QIAcuity dPCR Nano（分区数：26,000，CV≤5%）

3. 流式细胞仪： CytoFLEX S（激光配置：405/488/561/640nm，分辨率：<1.5% CV）

4. 纳米颗粒跟踪分析仪： Malvern NanoSight NS300（检测范围：10-2000nm，浓度上限10^9/mL）

5. 透射电子显微镜： Hitachi HT7800（分辨率：0.14 nm，加速电压：40-120 kV）

6. 分析型超速离心机： Beckman Optima AUC（转速：3,000-60,000 rpm，光学系统：UV-Vis/RI）

7. 全自动酶标仪： Tecan Spark（波长范围：200-999nm，OD精度：±0.5%）

8. 细胞成像分析系统： Sartorius Incucyte SX5（实时动态监测，孔板兼容：6-384孔）

9. 毛细管电泳仪： Agilent 7100（电压范围：0-30 kV，检测限：0.1 ng/μL）

10. 超高效液相色谱： Waters ACQUITY UPLC（压力上限：15,000 psi，柱温范围：4-90℃）

11. 生物安全柜： Esco Airstream Class II（洁净等级：ISO 5，进风风速：0.55 m/s）

12. 程序降温仪： Planer Kryo 560（降温速率：0.01-100℃/min，控温精度：±0.1℃）

13. 冷冻切片机： Leica CM1950（切片厚度：1-100 μm，样品台温度：-50℃）

14. 梯度PCR仪： Bio-Rad T100（温控精度：±0.1℃，升降温速率：5℃/s）

15. 超速离心机： Beckman Optima XPN-100（最大转速：100,000 rpm，最大

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

　　以上是与病毒滴度检测相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。