血清药品特异性抗体检测

检测项目

抗体类型鉴定：

• IgG类型：定性检测（参照ELISA法）、亚型分布（IgG1/IgG2/IgG3/IgG4）
• IgM类型：阳性判定阈值（OD值≥2.1×阴性对照）、交叉反应排除（与IgG的区分度≥90%）
• IgA类型：样本稀释倍数（1:50）、检测下限（0.1μg/mL）

抗体滴度测定：

• 终点稀释法：滴度值（≥1:100为阳性）、重复性偏差（±1个稀释度）
• 荧光免疫法：相对荧光强度（RFU≥500）、线性范围（1:10-1:10000）
• 化学发光法：信号值（S/CO≥2.0）、最低检测限（0.05IU/mL）

亲和力评估：

• 解离常数（KD）：≤1×10⁻⁹M（参照Biacore法）、温度依赖性（25℃±1℃）
• 结合常数（Ka）：≥1×10⁶M⁻¹s⁻¹、动力学曲线拟合度（R²≥0.95）
• 亲和力指数（AI）：≥1.0（指示高亲和力）、浓度依赖性（0.1-10μg/mL）

交叉反应分析：

• 同源蛋白交叉：反应率（≤5%）、信号差异（≥3倍阈值）
• 异源药物交叉：结合率（≤10%）、竞争抑制率（≥90%）
• 内源性抗体交叉：排除率（≥95%）、验证方法（免疫沉淀法）

中和活性检测：

• 细胞增殖抑制：IC50值（≤1μg/mL）、细胞活力（≥80%）
• 细胞因子抑制：TNF-α抑制率（≥50%）、IL-6降低幅度（≥40pg/mL）
• 病毒中和：中和效价（≥1:20）、plaquereductionassay（PRNT50）

同种异型抗体检测：

• IgG同种异型：G1m(3)、G1m(17)分型（参照PCR-SSP法）
• IgA同种异型：A2m(1)、A2m(2)频率（±5%人群分布）
• IgM同种异型：M1、M2亚型（测序法验证）

Fc段功能分析：

• 补体依赖细胞毒性（CDC）：细胞裂解率（≥30%）、补体浓度（10%人血清）
• 抗体依赖细胞介导细胞毒性（ADCC）：效应细胞比例（10:1）、靶细胞死亡率（≥25%）
• Fcγ受体结合：FcγRIIIa亲和力（KD≤5×10⁻⁸M）、FcγRIIb抑制率（≥20%）

抗体亚类分型：

• IgG1：比例（≥60%）、分泌细胞频率（CD19⁺CD27⁺IgG1⁺%）
• IgG2：表达水平（≤20%）、糖基化修饰（岩藻糖含量±0.5%）
• IgG4：转换率（≥10%）、稳定性（37℃放置7天活性保留≥80%）

药物结合位点分析：

• 表位mapping：重叠肽段结合率（≥70%）、竞争实验验证（≥90%抑制）
• 构象表位：变性条件（8M尿素）、结合丧失率（≥95%）
• 线性表位：肽段长度（15-20aa）、序列覆盖率（≥80%）

稳定性评估：

• 热稳定性：Tm值（≥60℃）、聚集率（≤5%）
• 冻融稳定性：活性保留（≥90%，3次冻融）、沉淀量（≤0.1mg/mL）
• 长期稳定性：4℃放置6个月活性（≥85%）、-20℃放置12个月降解率（≤10%）

免疫复合物检测：

• 复合物浓度：≥10μg/mL（透射比浊法）、颗粒大小（10-100nm）
• 药物-抗体比例：1:1结合（molarratio）、解离率（≤5%/h）
• 补体结合：C3c含量（≥1μg/mL）、C1q结合率（≥15%）

检测范围

1.治疗性单抗药物：涵盖利妥昔单抗、曲妥珠单抗、帕博利珠单抗等靶点药物，重点检测抗药抗体（ADA）的存在及效价，评估免疫原性对疗效的影响

2.重组蛋白药物：包括胰岛素、生长激素、促红细胞生成素（EPO）等，侧重检测中和性抗体对药物生物学活性的抑制作用

3.疫苗佐剂复合物：涵盖铝佐剂疫苗、油乳剂疫苗，重点检测佐剂诱导的特异性抗体类型及亲和力

4.生物类似药：包括贝伐珠单抗生物类似药、阿达木单抗生物类似药，侧重与原研药的抗体交叉反应及中和活性差异

5.细胞治疗产品：涵盖CAR-T细胞、干细胞产品，重点检测针对载体蛋白（如CD19scFv）的抗体

6.基因治疗载体：包括腺病毒载体、慢病毒载体，重点检测针对载体外壳蛋白的中和抗体

7.血液制品：涵盖人免疫球蛋白、凝血因子Ⅷ，重点检测同种异型抗体及自身抗体

8.抗体偶联药物（ADC）：包括曲妥珠单抗-DM1、维布妥昔单抗，重点检测针对抗体部分的ADA及对细胞毒性载荷的影响

9.融合蛋白药物：包括依那西普（TNFR-Fc）、阿巴西普（CTLA4-Fc），重点检测针对Fc段的抗体及功能抑制

10.多肽类药物：包括格拉替雷、利拉鲁肽，重点检测针对多肽序列的高亲和力抗体

检测方法

国际标准：

• ISO17123-1:2020生物制品中抗药抗体检测第1部分：通用要求（规定了样本前处理及对照设置）
• ASTME1383-19荧光免疫分析标准实践（强调荧光素标记效率及背景信号控制）
• ISO20186-1:2019流式细胞术第1部分：总则（指导细胞表面抗体结合检测的仪器校准）
• ICHQ6B:2005生物制品的检测方法验证（规定了抗体检测的特异性、灵敏度验证要求）

国家标准：

• GB/T38572-2020生物制品中抗药抗体检测通则（明确了ELISA法的临界值计算方法，采用2.1倍阴性对照均值）
• GB/T21415-2020动物源性材料中抗体检测方法（规定了样本预处理的温度条件为2-8℃）
• GB/T35918-2018流式细胞术检测抗体结合能力指南（强调仪器的荧光补偿设置，要求补偿率≥95%）
• GB/T39789-2021生物类似药相似性评价指南（指导抗药抗体交叉反应的比较研究）

国际标准与国家标准的方法差异主要体现在临界值计算（ISO17123-1采用3倍阴性对照均值，GB/T38572采用2.1倍）、样本稀释倍数（ASTME1383推荐1:100，GB/T21415推荐1:50）及荧光补偿要求（ISO20186-1要求补偿率≥90%，GB/T35918要求≥95%）

检测设备

1.酶标仪：ThermoScientificMultiskanFC（波长范围400-750nm，检测精度±1%，板型兼容96/384孔，支持双波长检测）

2.流式细胞仪：BDFACSCantoII（激光波长488nm、633nm，检测通道10色，最小颗粒检测尺寸0.2μm，流速1000cells/sec）

3.表面等离子体共振仪（SPR）：BiacoreT200（灵敏度0.01RU，流速范围1-100μL/min，温度控制25℃±0.1℃，支持多通道并行检测）

4.荧光显微镜：LeicaDMi8（荧光激发块DAPI/GFP/RFP/Cy5，分辨率1920×1080，放大倍数10×-63×，支持活细胞成像）

5.高速离心机：Eppendorf5810R（最大转速15000rpm，容量4×50mL，离心力21952×g，温度控制4℃±1℃）

6.生物安全柜：ESCOAirstream®A2（过滤效率99.995%@0.3μm，风速0.5m/s±0.05，工作区尺寸1500×750×600mm，支持三级生物安全防护）

7.超低温冰箱：ThermoFisherUltra-Low-86℃（容量519L，温度波动±1℃，制冷剂R404A，能耗≤1.2kW/h）

8.实时定量PCR仪：AppliedBiosystemsQuantStudio5（荧光通道6色，检测限10copies/μL，反应体积10-100μL，支持多重PCR）

9.蛋白层析系统：ÄKTApure25（流速范围0.1-25mL/min，压力上限10MPa，检测波长280nm/260nm，支持自动馏分收集）

10.全自动免疫分析仪：RocheCobase602（检测速度170tests/h，试剂位48个，样本位150个，支持电化学发光与比浊法）

11.质谱仪：BrukermaXisII（分辨率150000FWHM，质量范围50-10000m/z，灵敏度100amol，支持ESI/APCI离子源）

12.电泳仪：Bio-RadPowerPacHC（输出电压20-300V，电流0.1-2.5A，功率500W，支持垂直/水平电泳）

13.化学发光分析仪：SiemensADVIACentaurXP（检测项目≥150项，throughput200tests/h，最低检测限0.01pg/mL，支持磁性微粒子分离）

14.免疫沉淀仪：BeckmanCoulterBiomek4000（移液精度±1%，处理容量1-1000μL，支持96孔板自动化操作，整合超声破碎功能）

15.细胞培养箱：ThermoFisherForma3111（CO₂浓度控制5%±0.1%，温度37℃±0.1℃，湿度≥95%，容量180L，支持HEPA过滤）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"血清药品特异性抗体检测"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。