检测项目

1.病毒RNA实时荧光定量PCR检测：靶向VP1基因保守区（引物Echo-F:5'-CCTGAATGCGGCTAATCC-3'；Echo-R:5'-ATTGTCACCATAAGCAGCCA-3'），灵敏度≤50copies/mL

2.血清IgM/IgG抗体ELISA检测：采用重组VP2抗原包被（浓度2.5μg/mL），OD450临界值≥0.25判定阳性

3.病毒分离培养：RD细胞系（人横纹肌肉瘤细胞）病变效应观察（CPE≥50%判定阳性）

4.中和抗体效价测定：采用微量中和试验（96孔板），效价≥1:8具有保护性

5.全基因组测序分析：Illumina平台PE150测序模式，覆盖度≥99.5%

检测范围

1.临床样本：脑脊液（无菌采集≥1mL）、咽拭子（保存于病毒运输液）、血清（分离后-80℃冻存）

2.环境样本：污水（浓缩后检测限需达10PFU/L）、物体表面拭子（采样面积1010cm）

3.生物制品：疫苗生产用细胞基质（Vero细胞传代稳定性验证）

4.食品样本：乳制品中病毒存活率测定（pH3.0耐受试验）

5.实验动物：乳鼠脑组织病理学检查（HE染色神经元病变评估）

检测方法

ISO15189:2022《医学实验室质量和能力要求》规范样本前处理流程

GB/T37871-2019《核酸检测基本术语》定义Ct值判定标准

WS/T683-2020《肠道病毒实验室检测技术指南》规定中和试验操作细则

ASTME2888-19《病毒滴度测定标准方法》指导空斑形成单位计算

YY/T1596-2017《人类基因扩增检测试剂盒》规范PCR试剂性能验证

检测设备

ABIQuantStudio7Flex实时荧光定量PCR仪：支持TaqMan探针法多重检测

BioTekELx808酶标仪：具备450/630nm双波长自动校正功能

ThermoHeracell150iCO₂培养箱：温度波动≤0.3℃，CO₂控制精度0.1%

EppendorfCentrifuge5430R：最大RCF30,000g，适配深孔板离心

IlluminaNovaSeq6000测序系统：通量最高达6Tb/run，Q30≥85%

SartoriusBiostatB-DCUⅡ生物反应器：用于大规模病毒培养（工作体积3-15L）

LeicaDMi8倒置显微镜：配备10/20/40长工作距离物镜

BeckmanCoulterCytoFLEX流式细胞仪：支持405/488/638nm三激光激发

MiltenyiBiotecGentleMACS组织处理器：实现自动化样本均质化处理

SysmexXN-9000血液分析仪：白细胞分类计数辅助诊断继发感染