检测项目

1.半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（CystatinC）浓度测定：采用免疫比浊法或ELISA法，灵敏度≤0.1mg/L。

2.抑制剂活性分析：基于底物荧光标记法（Z-Phe-Arg-MCA），活性单位定义为μmol/min/mg。

3.分子量及结构完整性检测：通过SDS-PAGE电泳结合WesternBlot验证13kDa单链蛋白结构。

4.氧化修饰状态评估：利用质谱技术（LC-MS/MS）检测Cys3位点硫醇基氧化水平。

5.基因表达定量：RT-qPCR法测定CST3基因mRNA表达量（引物序列：F:5'-GGCCTGAAGACCAAGATGG-3',R:5'-TCCAGCCACACTGGTACTTG-3'）。

检测范围

1.人体生物体液：血清、血浆、尿液及脑脊液样本。

2.细胞裂解液：原代培养细胞或肿瘤细胞系（如HEK293、HepG2）提取物。

3.组织匀浆液：肾脏、肝脏及脑组织样本（需经0.1%TritonX-100裂解）。

4.重组蛋白制品：大肠杆菌或哺乳动物表达系统生产的rhCystatinC。

5.药物代谢产物：含Cystatin抑制剂的药代动力学研究样本。

检测方法

1.ELISA法：依据ISO15189:2012医学实验室标准，使用双抗体夹心法（包被抗体Anti-HumanCystatinCclone3D3）。

2.高效液相色谱法（HPLC）：参照GB/T27417-2017标准，C18色谱柱（4.6250mm），流动相乙腈-0.1%TFA。

3.表面等离子共振（SPR）：基于ASTME2537-15标准，BiacoreT200系统测定结合动力学参数（KD值）。

4.毛细管电泳法：按GB/T32465-2015执行，运行缓冲液为50mM硼酸盐（pH8.5），电压20kV。

5.同位素稀释质谱法（ID-MS）：遵循ISO17511:2020量值溯源要求。

检测设备

1.ThermoFisherMultiskanSkyHigh酶标仪：波长范围340-850nm，支持96/384孔板吸光度读取。

2.Agilent6495B三重四极杆质谱仪：质量精度0.1Da，MRM模式定量限0.01ng/mL。

3.Bio-RadChemiDocMP成像系统：用于WesternBlot化学发光信号捕获（动态范围4logs）。

4.WatersACQUITYUPLCH-Class系统：配备PDA检测器，流速范围0.001-2mL/min。

5.BeckmanCoulterAU5800全自动生化分析仪：支持免疫比浊法批量检测（通量≥800测试/小时）。

6.EppendorfMastercyclerX50PCR仪：温控精度0.1℃，支持梯度PCR扩增。

7.MalvernZetasizerNanoZS90动态光散射仪：粒径测量范围0.3nm-10μm。

8.ShimadzuGCMS-QP2020NX气相色谱质谱联用仪：EI源电离模式，质量范围m/z10-1100。