检测项目

1.纯度测定：采用RP-HPLC法检测主峰面积占比≥98.0%，杂质峰总和≤2.0%

2.效价分析：通过体外细胞增殖试验（RIN-5F细胞系）测定生物活性≥27.5IU/mg

3.宿主蛋白残留：ELISA法检测大肠杆菌宿主蛋白≤100ppm

4.内毒素检测：鲎试剂法（LAL）测定≤10EU/mg

5.二硫键分析：质谱法验证3对完整二硫键结构正确率≥99%

检测范围

1.重组人胰岛素原料药（冻干粉末）

2.预混型胰岛素注射液（30/70比例制剂）

3.发酵过程中间产物（包含前体蛋白）

4.生物类似药开发对照品

5.药用辅料（锌离子、苯酚等添加剂）

检测方法

ISO9001:2015质量管理体系下的生物制品检验规范

GB/T34820-2017《重组人胰岛素质量控制要求》

USP<121>胰岛素效价测定法（小鼠惊厥法）

ASTME3066-16色谱法测定蛋白质纯度标准指南

EP2.5.8欧洲药典内毒素检测规范

检测设备

Agilent1260InfinityIIHPLC系统：配备ZORBAXSB-C18色谱柱（4.6250mm,5μm），流速1.0mL/min

ThermoFisherQExactiveHybridQuadrupole-Orbitrap质谱仪：分辨率140,000@m/z200

SartoriusCPA225D电子天平：称量精度0.01mg/220g

PerkinElmerEnVision多模式酶标仪：支持TRF/AlphaScreen双模式检测

WatersACQUITYUPLCH-Class系统：配备BEH300C4色谱柱（2.1100mm,1.7μm）

MalvernZetasizerNanoZSP动态光散射仪：粒径测量范围0.3nm-10μm

CytivaKTApure25层析系统：UV280/260nm双波长监测蛋白纯度

ShimadzuGC-2030气相色谱仪：配备HS-20顶空进样器（苯酚残留检测）