核酸定量试验

检测项目

1.核酸浓度测定：检测范围1 ng/μL - 1000 ng/μL，下限灵敏度0.1 ng/μL

2.A260/A280比值分析：纯度标准1.8-2.0，偏差允许±0.05

3.A260/A230比值评估：污染物检测目标值≤2.0，上限警戒值2.5

4.DNA完整性检测：凝胶电泳条带清晰度，片段大小分布误差±5%

5.RNA完整性数测定：RIN值≥7.0，降解阈值≤5.0

6.荧光定量灵敏度：Qubit检测下限0.1 ng/μL，线性范围1-1000 ng/μL

7.PCR扩增效率分析：Ct值标准范围15-35，扩增效率90%-110%

8.样本体积准确度：移液偏差±1%，重复性CV≤2%

9.酶活性残留检测：DNase活性≤0.01 U/μL，RNase活性≤0.005 U/μL

10.样本均一性验证：浓度变异系数CV≤5%，温度稳定性±1°C

11.核酸回收率测试：标准回收率≥95%，损失率上限5%

12.污染物定量：蛋白质残留≤0.1 μg/μL，盐离子浓度≤10 mM

检测范围

1.基因组DNA提取物：来源哺乳动物细胞，浓度范围50-500 ng/μL

2.质粒DNA样本：环状DNA结构，大小1-20 kbp，纯度要求A260/A280≥1.85

3.PCR扩增产物：扩增片段长度100-1000 bp，产物浓度10-500 ng/μL

4.总RNA样本：真核细胞来源，RIN值≥7.0，降解阈值检测

5.cDNA文库：逆转录产物，完整性要求无降解，浓度20-200 ng/μL

6.病毒核酸样本：如HIV或SARS-CoV-2 RNA，检测下限1 copy/μL

7.环境样本核酸：土壤或水体提取物，污染物控制A260/A230≤2.2

8.法医DNA样本：微量人类DNA，浓度下限0.1 ng/μL，纯度严格标准

9.合成寡核苷酸：长度20-100 nt，序列准确性验证，浓度5-100 μM

10.细胞裂解物：直接裂解产物，核酸释放效率≥90%，杂质残留检测

11.微生物核酸：细菌或真菌DNA，GC含量20%-70%，浓度范围10-300 ng/μL

12.高通量测序文库：适配体连接样本，片段大小分布150-800 bp，均一性CV≤3%

检测方法

国际标准：

ISO 20391-1:2018细胞计数和活力-核酸定量部分

ASTM E2149-20抗菌材料测试-核酸污染物评估

ISO/IEC 17025:2017检测实验室能力-核酸定量通用要求

ISO 22174:2021分子诊断-病毒核酸检测方法

ASTM E1873-20生物样本核酸提取和纯化规程

ISO 17822:2020体外诊断-核酸扩增技术

ASTM E2656-18荧光定量检测标准指南

ISO 13485:2016医疗器械-核酸样本质量管理

ASTM E2520-21凝胶电泳核酸完整性分析

ISO 15189:2022医学实验室-核酸定量准确度验证

国家标准：

GB/T 19495.1-2020核酸检测技术-通用要求

GB/T 30988-2014生物样本DNA提取和纯化方法

GB/T 37870-2019基因检测-核酸定量标准

GB/T 39198-2020RNA完整性检测技术规范

GB/T 39730-2020荧光定量PCR检测方法

GB/T 37871-2019分子生物学-核酸浓度测定

GB/T 30989-2014PCR产物纯化及检测

GB/T 39197-2020高通量测序-文库构建质量

GB/T 37872-2019环境样本核酸提取标准

GB/T 39731-2020法医DNA定量技术要求

检测设备

1.紫外分光光度计：型号UV-3000.波长范围190-800 nm，吸光度精度±0.001

2.荧光定量仪：型号FLQ-200.检测灵敏度0.01 ng/μL，支持多种染料

3.实时定量PCR系统：型号qPCR-500.温度控制精度±0.1°C，通量96孔

4.凝胶成像分析仪：型号GIA-400.分辨率8百万像素，条带分析误差±2%

5.微量核酸定量仪：型号MicroNQ-100.样本体积1-2 μL，浓度范围0.2-2000 ng/μL

6.自动化移液系统：型号AutoPip-50.移液精度±0.5%，支持高吞吐量

7.电泳仪：型号EP-600.电压范围1-300 V，凝胶分离时间5-30 min

8.核酸完整性分析仪：型号RIN-700.RIN值检测范围1-10，分辨率0.1

9.离心浓缩设备：型号CentriCon-800.转速100-15000 rpm，样本回收率≥95%

10.恒温混匀器：型号MixTemp-200.温度范围4-99°C，振荡频率可调

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"核酸定量试验"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检检测技术研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。