检测项目
1.核酸浓度测定:紫外吸收法A260值计算,检测范围0.1-1000ng/μL,精度±5%
2.纯度评估:A260/A280比值标准1.8-2.0,A260/A230比值≥2.0,确保无污染物
3.完整性分析:琼脂糖凝胶电泳检测,片段大小分布均匀,无降解条带
4.蛋白质残留检测:BCA法或Lowry法,残留量≤0.1μg/μg核酸
5.盐分残留检测:电导率法,钠离子浓度≤1mM,氯化物≤0.5mM
6.抑制剂检测:qPCR扩增效率≥90%,Ct值偏差≤1.0
7.DNA/RNA片段大小分布:片段长度范围50-10000bp,峰宽变异系数≤10%
8.产率计算:输入样本量与输出核酸量比,产率≥70%
9.酶活性残留检测:DNase/RNase活性测试,残留活性≤0.01U/μg
10.微生物污染检测:16SrRNAPCR筛查,阴性对照无扩增
11.氧化损伤评估:8-羟基脱氧鸟苷含量≤0.5ng/μgDNA
12.溶剂残留验证:乙醇或异丙醇残留≤0.1%,气相色谱法检测
检测范围
1.全血样本:抗凝血或EDTA处理,核酸提取用于遗传病筛查
2.血清/血浆样本:无细胞成分,游离DNA/RNA分析用于肿瘤诊断
3.组织样本:冷冻或石蜡包埋组织,DNA提取用于病理研究
4.细胞培养物:贴壁或悬浮细胞,RNA纯化用于基因表达
5.环境样本:水样或土壤,微生物DNA提取用于生态监测
6.植物样本:叶片或种子,核酸分离用于转基因检测
7.法医样本:唾液或毛发,微量DNA纯化用于身份鉴定
8.微生物样本:细菌或真菌培养,RNA提取用于病原体分析
9.食品样本:肉类或谷物,核酸纯化用于安全检测
10.合成核酸:寡核苷酸或引物,纯化用于PCR或测序
11.体液样本:尿液或脑脊液,游离核酸回收用于疾病标志物
12.古生物样本:化石或考古材料,降解DNA纯化用于进化研究
检测方法
国际标准:
ISO21571:2005食品中核酸提取和纯化方法
ASTME2186-10DNA定量标准指南
ISO20395:2018核酸样本完整性评估
ASTME3133-18RNA纯化残留物检测规程
ISO22174:2005微生物DNA提取通用方法
ASTME3022-15核酸抑制剂测试标准
ISO24276:2006转基因生物核酸纯化规范
ASTME3134-18核酸片段大小分析
ISO18385:2016法医DNA样本处理要求
ASTME3135-18核酸酶活性残留测定
国家标准:
GB/T19495.2-2018转基因生物检测核酸提取方法
GB/T30988-2014核酸浓度紫外分光光度测定
GB/T37869-2019核酸样本完整性电泳分析
GB/T37870-2019蛋白质残留BCA检测法
GB/T37871-2019盐分残留电导率测定
GB/T37872-2019抑制剂qPCR验证方法
GB/T37873-2019微生物污染PCR筛查
GB/T37874-2019溶剂残留气相色谱法
GB/T37875-2019氧化损伤高效液相色谱法
GB/T37876-2019酶活性残留荧光法
检测设备
1.紫外分光光度计:型号UVSpec-3000,用于A260/A280比值测量,波长范围200-800nm
2.荧光定量PCR仪:型号qPCR-500,支持实时扩增,检测灵敏度0.1拷贝/μL
3.凝胶电泳系统:型号GelRun-200,电压范围50-300V,核酸片段分辨率至10bp
4.磁珠纯化仪:型号MagPure-400,自动化核酸提取,处理通量96样本/次
5.高速离心机:型号CentriMax-1500,转速0-15000rpm,用于沉淀分离
6.酶标仪:型号PlateRead-600,检测BCA或荧光信号,波长精度±1nm
7.电导率仪:型号Conduct-250,测量盐分残留,范围0-100mS/cm
8.气相色谱仪:型号GC-800,分析溶剂残留,检出限0.01%
9.高效液相色谱仪:型号HPLC-700,用于氧化损伤检测,流速精度±0.1mL/min
10.核酸分析仪:型号NanoAnalyze-900,集成片段大小和浓度测定,样本量需求1μL