检测项目
凝胶制备检测:
- 凝胶浓度:0.8%-2.0%(琼脂糖,参照ISO17025)
- 凝胶厚度:3mm-5mm(聚丙烯酰胺,参照ASTME252)
- 固化时间:≥30分钟(室温)
- 核酸浓度:20ng/μL-100ng/μL(分光光度法,OD260/280=1.8-2.0)
- 样品加载量:5μL-20μL(精度±0.5μL)
- 染料添加比例:1:10000(溴化乙锭,参照GB/T19495.1)
- 运行电压:50V-150V(恒定模式,误差±5%)
- 运行时间:30分钟-120分钟(基于分子大小)
- 缓冲液电导率:1.5mS/cm-2.0mS/cm(TAE缓冲液,pH8.3)
- 染色时间:10分钟-30分钟(溴化乙锭,参照ISO22174)
- 荧光强度:≥5000AU(SYBRGreen染色)
- 背景噪声:≤5%信号强度
- 成像分辨率:≥5MP(紫外透射仪)
- 分子量测定精度:±10bp(DNAladder校准)
- 条带迁移距离:0.5cm-10cm(误差±0.1cm)
- 凝胶均匀度:CV≤5%(参照ASTME177)
- 核酸降解率:≤10%(RNA完整性检测)
- 交叉污染:阴性对照无条带
- 标准曲线线性:R²≥0.99(DNAladder)
- 片段大小范围:100bp-10000bp(参照GB/T19495.2)
- pH稳定性:8.0-8.5(TBE缓冲液)
- 离子强度:0.5M-1.0M(TAE缓冲液)
- 温度影响:±1°C偏差控制
- 运行温度:4°C-25°C(恒温系统)
- 冷却效率:≤2°C/min变化
- UV暴露时间:≤5分钟(操作员保护)
- 废物处理:符合生物安全等级1
检测范围
1.基因组DNA:涵盖人类、动植物来源,检测重点为分子量分布(如20kb-50kb)和完整性评估(无降解条带)。
2.质粒DNA:包括超螺旋和线性形式,检测重点为大小(2kb-15kb)和纯度(无RNA污染)。
3.RNA样品:总RNA或mRNA,检测重点为完整性(28S/18S比值≥1.8)和降解程度(无smear现象)。
4.PCR产物:扩增后DNA片段,检测重点为片段大小(100bp-3000bp)和特异性(单一明亮条带)。
5.限制性酶切片段:消化后核酸,检测重点为消化效率(清晰条带)和大小分析(50bp-1000bp)。
6.cDNA合成产物:反转录后DNA,检测重点为大小范围(0.5kb-5kb)和反转录效率。
7.microRNA:小分子RNA,检测重点为分离效果(15nt-25nt)和定量精度。
8.DNAladder标准:分子量标记,检测重点为校准曲线线性(R²≥0.99)和条带清晰度。
9.环境样品核酸:土壤或水体提取物,检测重点为污染物影响(抑制剂检测)和回收率。
10.临床样品核酸:血液或组织来源,检测重点为病原体检测(如病毒片段)和样品稳定性。
检测方法
国际标准:
- ISO17025:2017检测和校准实验室能力通用要求(涵盖整体质量控制)
- ISO22174:2005食物病原体检测分子方法(核酸电泳差异:电压设置更严格)
- ASTME252-06生物材料电泳测试标准(凝胶制备差异:聚丙烯酰胺浓度要求更高)
- GB/T19495.1-2004转基因产品检测核酸提取方法(差异:缓冲液pH要求8.0)
- GB/T19495.2-2004转基因产品检测PCR方法(核酸电泳差异:运行时间缩短)
- GB/T27403-2008实验室质量控制规范分子生物学(成像分析差异:分辨率标准更高)
检测设备
1.电泳槽:ModelE-200型(槽尺寸200mm×200mm,最大电压300V)
2.电源供应器:PowerUnitPU-500型(输出电压0-500V,电流0-400mA)
3.凝胶成像系统:ImagerI-500型(分辨率5MP,波长302nm)
4.微量移液器:PipetteP-10型(量程0.5-10μL,精度±0.1μL)
5.离心机:CentrifugeC-1500型(转速0-15000rpm,容量50mL)
6.恒温水浴:WaterBathWB-100型(温度范围20-100°C,精度±0.5°C)
7.UV透射仪:UVTransilluminatorUVT-300型(波长254nm-365nm,功率20W)
8.分光光度计:SpectrometerS-250型(波长范围200-800nm,检测限0.1ng/μL)
9.凝胶铸模:CastingMoldM-150型(尺寸150mm×150mm,厚度可调)
10.样品加载器:LoaderSL-20型(精度±0.2μL,容量20μL)
11.恒温摇床:ShakerSH-50型(转速50-300rpm,温度控制±1°C)
12.安全柜:SafetyCabinetSC-100型(生物安全等级1,UV消毒)
13.电泳缓冲液混合器:MixerMX-100型(混合效率99%,容量500mL)
14.成像软件系统:AnalysisSoftwareAS-400型(支持条带量化,误差±1%)
15.温度监控器:ThermometerTM-50型(范围-10°Cto100°C,精度±0.1°C)