可送检的样品类型与对应检测项目
| 样品类型 | 典型应用场景 | 主要检测项目 | 常用方法 / 参考 |
|---|---|---|---|
| 曲霉属分离株（黄曲霉、寄生曲霉） | 花生、玉米、坚果及其制品中分离的疑似产毒菌株 | 黄曲霉毒素产毒型基因鉴定（aflR、nor-1、ver-1）、形态学鉴定、产毒能力验证 | GB 4789.16-2016形态学鉴定；实时荧光PCR扩增毒素合成簇基因；玉米产毒培养基28℃培养后HPLC定量确认 |
| 青霉属分离株（扩展青霉、橘青霉、岛青霉） | 苹果及其制品、谷物、干酪等原料污染菌株 | 展青霉素与桔青霉素产毒型判定、帚状枝形态观察、菌株纯度复核 | GB 4789.16-2016；SN/T 1035-2011；PDA与麦芽汁琼脂25℃培养观察 |
| 镰刀菌属分离株（禾谷镰刀菌、串珠镰刀菌、尖孢镰刀菌） | 小麦、玉米及配合饲料原料的穗腐与仓储污染株 | 脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、伏马毒素产毒型判定（tri5、tri6、PKS4、fum1基因型）、大型分生孢子形态观察 | GB 4789.16-2016；PCR扩增tri簇与PKS簇基因；绿豆或玉米产毒培养基培养验证 |
| 赭曲霉与疣孢青霉分离株 | 咖啡豆、葡萄干、香辛料中的优势污染菌株 | 赭曲霉毒素A产毒型判定（otapks基因）、菌落与分生孢子头特征描述 | SN/T 1035-2011；实时荧光PCR；YES培养基产毒培养后荧光检测确认，用于真菌产毒型判定 |
| 粮食与饲料污染真菌混合群 | 原粮、饼粕、配合饲料入库验收与在库监测 | 霉菌和酵母计数、优势菌分离纯化、产毒霉菌检出率与型别分布 | GB 4789.15-2016计数；GB 4789.16-2016鉴定；ISO 21527-2:2008参照 |
| 发酵制剂与工业用曲菌株 | 酿酒用曲、制酱用曲、酶制剂生产菌株安全性评价 | 真菌产毒型安全性筛查、菌株纯度与活力检查、产毒培养复核 | GB 4789.16-2016形态学鉴定；产毒培养基培养后毒素定量复核 |
| 其他产毒真菌（链格孢属等） | 小麦、番茄制品、油料中的伴生真菌 | 产毒型别初筛、产孢结构观察、多基因组合分型 | GB 4789.16-2016参照；多基因PCR分型；察氏琼脂培养 |
检测项目
1. 产毒霉菌形态学鉴定：蔡氏琼脂、PDA等培养基25~28℃培养7~14d，观察菌落正反面颜色、质地与产孢结构，乳酸酚棉蓝染色镜检放大400~1000倍，是真菌产毒型判定的表型基础。
2. 产毒基因型鉴定：PCR与实时荧光PCR扩增aflR、nor-1、ver-1、tri5、tri6、PKS4、fum1等毒素合成基因，目的片段100~700bp，凝胶电泳条带清晰或荧光通道Ct值≤35判定阳性。
3. 产毒能力验证：玉米、大米产毒培养基25~28℃培养14~21d后提取测定，黄曲霉毒素B1方法检出限可达0.03μg/kg，脱氧雪腐镰刀菌烯醇检出限10μg/kg量级。
4. 霉菌和酵母计数：28℃培养5d，选取菌落数10~150 CFU的平板计数，结果以CFU/g（mL）报告。
5. 菌株纯度与活力检查：PDA斜面28℃培养5~7d，镜检无杂菌、菌落生长正常、产孢良好判定合格。
检测范围
1. 曲霉属：黄曲霉、寄生曲霉、赭曲霉、构巢曲霉、杂色曲霉等常见产毒种。
2. 青霉属：扩展青霉、橘青霉、岛青霉、疣孢青霉、娄地青霉等。
3. 镰刀菌属：禾谷镰刀菌、串珠镰刀菌、尖孢镰刀菌、茄病镰刀菌、拟枝孢镰刀菌等。
4. 其他产毒真菌：链格孢属、木霉属及其伴生污染真菌。
5. 送检对象：原粮与油料、坚果、饲料及原料、香辛料、干制果蔬中分离的纯培养物，以及发酵与工业用曲菌株。
检测方法
1. GB 4789.16-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 常见产毒霉菌的形态学鉴定，适用于曲霉属、青霉属、镰刀菌属及其他菌属常见产毒真菌，系真菌产毒型形态学判定的主标准。
2. SN/T 1035-2011 进出口食品中产毒青霉属、曲霉属及其毒素的检测方法。
3. GB 4789.15-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 霉菌和酵母计数。
4. GB 5009.22-2016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定，用于产毒培养物的毒素定量确认。
5. GB 5009.111-2016 食品安全国家标准 食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定。
6. GB 5009.209-2016 食品安全国家标准 食品中玉米赤霉烯酮的测定。
7. ISO 21527-2:2008 食品和动物饲料的微生物学 霉菌和酵母计数 第2部分：低水分活度产品（参照）；产毒基因扩增判定按现行方法学文献与实验室协议口径执行。
检测设备
1. 二级生物安全柜(BSC-1100ⅡA2-X型)：操作区洁净度ISO 5级，工作窗口风速0.25~0.38m/s。
2. 恒温培养箱(LRH-250F型)：温度范围5~60℃，控温精度±0.5℃。
3. 生物显微镜(CX43型)：双目观察，放大40~1000倍，配乳酸酚棉蓝染色观察产孢结构。
4. 实时荧光定量PCR仪(QuantStudio 5型)：96孔，控温精度±0.1℃，FAM/VIC/ROX/Cy5四通道。
5. 梯度PCR仪(T100型)：升温速率最高5℃/s，温控精度±0.2℃。
6. 凝胶成像分析系统(GelDoc Go型)：500万像素，302nm紫外透射，支持核酸凝胶定量。
7. 高效液相色谱仪(LC-2050C型，配荧光检测器)：激发365nm/发射435nm，黄曲霉毒素检出限0.01μg/kg级。
8. 液相色谱串联质谱仪(LCMS-8050型)：三重四极杆，MRM模式定量，灵敏度达pg级。
9. 酶标分析仪(ELx808型)：波长400~750nm，标配450nm与630nm滤光片，用于毒素ELISA筛查。
10. 立式压力蒸汽灭菌器(LDZX-75L型)：温度105~135℃，121℃饱和蒸汽灭菌。