可送检的样品类型与对应检测项目
| 样品类型 | 典型应用场景 | 主要检测项目 | 常用方法 / 参考 |
|---|---|---|---|
| 培养细胞系（HEK293、HeLa、HepG2、CHO、PC12等） | 细胞应激机制研究、基因编辑细胞株验证、信号通路解析 | GRP78、CHOP、p-eIF2α等应激标志蛋白定量，XBP1基因剪接，内质网形态与钙库功能 | 免疫印迹法（参照GB/T 40225-2021）、RT-qPCR、透射电镜超薄切片、ER-Tracker活细胞染色 |
| 原代培养细胞（原代肝细胞、神经元、心肌细胞等） | 生理功能评价、毒理机制研究、代谢异常细胞模型分析 | 内质网钙库释放动态、应激通路激活、蛋白折叠功能、细胞活力基线 | Fluo-4/Fura-2钙成像、免疫印迹、MTS活力法（GB/T 41915-2022） |
| 干细胞与工程细胞（间充质干细胞、iPSC等） | 分化过程应激耐受评价、细胞产品质量研究 | 细胞计数与纯度、应激标志物水平、内质网荧光强度定量 | 流式细胞术（GB/T 39730-2020、GB/T 39729-2020）、共聚焦荧光成像 |
| 药物与化学品处理细胞样品 | 内质网应激诱导剂与抑制剂筛选、剂量效应关系研究 | GRP78剂量响应曲线、CHOP表达动态、通路激活阈值水平 | 免疫印迹、RT-qPCR、酶标仪比色法 |
| 纳米材料与生物材料处理细胞 | 纳米生物效应与生物相容性机制研究 | 内质网超微结构损伤、应激蛋白上调水平、摄取后形态学变化 | 透射电镜通则（GB/T 28044-2011）、免疫印迹、共聚焦成像 |
| 内质网丰富组织来源细胞组分（肝、脑、胰腺等） | 组织水平内质网功能研究、微粒体膜组分分析 | 标志蛋白富集度、膜蛋白表达、糖基化加工状态 | 差速离心分离、免疫印迹、Endo H/PNGase F酶切分析 |
检测项目
1. 内质网应激标志蛋白GRP78定量：免疫印迹法，内参校正后应激诱导组较空白组上调2~10倍量级（随诱导条件变化）
2. CHOP与p-eIF2α通路蛋白分析：免疫印迹半定量，p-eIF2α与总eIF2α灰度比值升高至基线2倍以上判为PERK通路激活阳性
3. XBP1基因剪接分析：RT-PCR跨剪接位点扩增，剪接型较未剪接型缺失26个碱基，凝胶电泳区分并计算剪接比例
4. 内质网超微形态观察：透射电镜超薄切片60~90nm，判读内质网池扩张、核糖体脱颗粒与膜结构完整性
5. 内质网钙库功能：Fluo-4荧光探针联合毒胡萝卜素诱导，胞质游离钙由静息约100nmol/L升至约1000nmol/L量级，评估钙库容量与释放速率
6. 细胞活力与应激基线：MTS比色法测定，正式应激试验处理剂量下活力宜保持85%以上，排除非特异性毒性干扰
检测范围
1. 常用培养细胞系：HEK293、HeLa、HepG2、CHO、PC12、RAW264.7等
2. 原代培养细胞：原代肝细胞、原代神经元、心肌细胞、软骨细胞等
3. 干细胞与编辑细胞：间充质干细胞、诱导多能干细胞及基因编辑细胞株
4. 处理因素样品：衣霉素、毒胡萝卜素、二硫苏糖醇等诱导体系，以及候选药物、纳米颗粒处理组
5. 组织来源样品：肝、脑、胰腺等内质网丰富组织的原代分离细胞与亚细胞组分
检测方法
1. GB/T 40225-2021 肌动蛋白抗体的检测 免疫印迹法（应激标志蛋白免疫印迹分析参照执行）
2. GB/T 42076.1-2022 生物技术 细胞计数 第1部分：细胞计数方法通则
3. GB/T 39730-2020 细胞计数通用要求 流式细胞测定法
4. GB/T 28044-2011 纳米材料生物效应的透射电子显微镜检测方法通则（内质网超微结构观察参照执行）
5. GB/T 42753-2023 实时荧光定量PCR仪性能评价通则（基因剪接分析平台校验参照）
6. GB/T 41915-2022 纳米技术 MTS法测定纳米颗粒的细胞毒性（应激试验活力基线测定）
7. GB/T 40365-2021 细胞无菌检测通则（试验样品培养质量控制）
检测设备
1. 透射电子显微镜(Hitachi HT7800)：加速电压40~120kV，点分辨率优于0.25nm，支持超微结构成像
2. 超薄切片机(Leica EM UC7)：切片厚度10~999nm可调，常规超薄切片60~90nm
3. 激光共聚焦显微镜(Zeiss LSM 900)：横向分辨约200nm，Z轴最小步进10nm量级，支持活细胞延时成像
4. 流式细胞仪(Beckman CytoFLEX)：配备FITC/PE/APC等多通道，检测速度可达10000 events/s量级
5. 实时荧光定量PCR仪(Bio-Rad CFX96)：5色通道以上，温控精度±0.2℃，支持熔解曲线分析
6. 化学发光成像系统(Bio-Rad ChemiDoc MP)：制冷CCD传感器，支持免疫印迹条带灰度定量
7. 垂直电泳系统(Bio-Rad Mini-PROTEAN Tetra)：胶厚1.0/1.5mm，电压范围50~200V
8. CO2培养箱(Thermo Heracell 150i)：温度37℃±0.2℃，CO2浓度5%±0.1%
9. 倒置荧光显微镜(Olympus IX73)：物镜4×~100×，适配ER-Tracker等荧光通道
10. 多功能酶标仪(BioTek Cytation 5)：波长范围230~999nm，支持MTS比色与荧光检测