叶酸代谢基因检测

可送检的样品类型与对应检测项目

检测项目

1. MTHFR C677T基因分型：判定CC、CT、TT三种基因型，文献典型数据显示677TT基因型亚甲基四氢叶酸还原酶活性约为CC野生型的30%，CT杂合型约为65%

2. MTHFR A1298C基因分型：判定AA、AC、CC基因型，与C677T位点联合构成单倍型组合，用于修正代谢能力评价

3. MTRR A66G基因分型：判定AA、AG、GG基因型，GG型甲硫氨酸合成酶还原酶活性下降，影响同型半胱氨酸再甲基化效率

4. 叶酸代谢能力综合分级：依据三位点基因型组合划分代谢能力等级，常见为正常、中风险、高风险三档，报告附各基因型酶活性相对水平

5. 关联表型指标：血浆同型半胱氨酸（酶循环法，成人理想水平一般低于10μmol/L）；血清叶酸与红细胞叶酸浓度（化学发光免疫法，缺乏判定界值按WS/T 600-2018规定执行）

检测范围

1. 外周血样本：EDTA抗凝全血、静脉血2至3mL，避免肝素抗凝抑制扩增

2. 口腔拭子样本：口腔黏膜脱落细胞，室温干燥保存便于寄送与长期留存

3. 干血斑样本：足跟血滤纸干斑，适用于新生儿样本与大规模筛查

4. 基因组DNA：浓度满足扩增要求，A260/A280比值1.7至2.0为合格区间

5. 质控品与参考品：阴性质控、野生型、杂合突变型与纯合突变型基因组DNA质控品

检测方法

1. WS/T 230-2024 实时荧光聚合酶链反应临床实验室应用指南（TaqMan探针法基因分型的主流依据）

2. GB/T 30989-2014 高通量基因测序技术规程（测序法分型与批量样本流程规范）

3. GB/T 35537-2017 高通量基因测序结果评价要求（测序数据质量与结果评价）

4. GB/T 42077-2022 生物技术 核酸靶序列定量方法的性能评价要求 qPCR法和dPCR法（方法学性能确认）

5. WS/T 600-2018 人群叶酸缺乏筛查方法（血清叶酸与红细胞叶酸营养状况判定）

6. GB/T 44586.1-2024 体外诊断医疗器械 多重核酸分子检测 第1部分：核酸质量评价术语和通用要求

检测设备

1. 实时荧光定量PCR仪：FAM、VIC、ROX、Cy5四通道荧光检测，控温精度±0.25℃，支持熔解曲线分析

2. 核酸提取仪：磁珠法自动化提取，单批通量32至96份，处理体积50至1000μL

3. 高通量基因测序仪：双端150bp读长模式，单次运行数据量数十至数百Gb，适配文库批量测序

4. 数字PCR系统：液滴生成每反应2万滴以上，绝对定量，变异等位基因频率分辨率达0.1%量级

5. 毛细管电泳测序仪：8至96通道毛细管阵列，单次读长可达800bp以上，用于Sanger测序验证

6. 普通PCR扩增仪：模块控温范围4至99.9℃，温控精度±0.2℃，梯度功能支持退火温度优化

7. 超微量分光光度计：检测波长190至850nm，给出A260/A280与A260/A230比值用于核酸纯度核查

8. 全自动生化分析仪：酶循环法测定血浆同型半胱氨酸，反应温度37℃，样本与试剂用量微升级

9. 化学发光免疫分析仪：血清叶酸与红细胞叶酸定量，灵敏度达ng/mL量级，支持批量上样

10. 超低温冰箱：保存温度-86℃，箱体温度均匀性±0.5℃，配温度连续记录用于样本库管理