抗生素耐药基因PCR扩增检测

检测项目

β-内酰胺酶基因检测：

• blaCTX-M基因检测：检测限≤10copies/μL，扩增效率≥95%（参照ISO22174）
• blaTEM基因检测：特异性100%，循环阈值≤35

碳青霉烯酶基因检测：

• KPC基因检测：扩增产物长度250bp，退火温度55°C
• NDM基因检测：灵敏度1pgDNA，参照GB/T30102-2013

氨基糖苷类耐药基因检测：

• aac(6')-Ib基因检测：扩增时间2min/cycle，引物浓度0.5μM
• aph(3')-Ia基因检测：阳性对照要求，动态范围10^1-10^6copies

四环素耐药基因检测：

• tet(A)基因检测：检测限20copies/μL，循环次数35cycles
• tet(M)基因检测：特异性98%，产物验证要求

磺胺类耐药基因检测：

• sul1基因检测：灵敏度0.5pgDNA，扩增效率≥90%
• sul2基因检测：退火温度58°C，参照ISO20837

氟喹诺酮类耐药基因检测：

• qnrA基因检测：Ct值≤30，引物特异性100%
• qnrS基因检测：扩增参数优化，检测动态范围10^2-10^7copies

大环内酯类耐药基因检测：

• erm(A)基因检测：特异性检测，产物长度180bp
• mecA基因检测：检测限15copies/μL，循环阈值设定

多黏菌素耐药基因检测：

• mcr-1基因检测：灵敏度5copies/μL，参照GB/T30105-2013
• mcr-3基因检测：扩增效率≥92%，温度精度±0.5°C

整合子相关基因检测：

• intI1基因检测：检测限10copies/μL，阳性对照要求
• qacEΔ1基因检测：特异性100%，参照ISO22118

其他耐药基因检测：

• vanA基因检测：扩增参数优化，动态范围10^3-10^8copies
• ampC基因检测：灵敏度优化，循环次数40cycles

检测范围

1.临床样本：包括血液、尿液和痰液，重点检测多重耐药基因如blaCTX-M和KPC的流行率及突变频率

2.环境水样：涵盖河水、废水和饮用水，重点检测耐药基因水平转移和丰度变化

3.食品样本：如肉类、奶制品和蔬菜，重点检测食源性病原体中sul1和tet(M)基因的污染水平

4.土壤样本：包括农田和工业区土壤，重点检测持久性耐药基因如erm(A)的生物累积

5.生物膜样本：如医疗器械表面生物膜，重点检测intI1和qacEΔ1基因的生物膜相关表达

6.动物源性样本：涵盖禽畜粪便和饲料，重点检测畜牧业中mcr-1和aac(6')-Ib基因的传播风险

7.植物样本：如农作物和灌溉作物，重点检测植物组织内耐药基因的吸附和转移机制

8.空气样本：包括尘埃和气溶胶，重点检测耐药基因的气载传播和qnrA基因的浓度监测

9.药品残留样本：如抗生素制剂和残留物，重点检测杂质中vanA和ampC基因的污染评估

10.废水处理样本：涵盖污泥和出水，重点检测处理过程中NDM和KPC基因的去除效率

检测方法

国际标准：

• ISO22174:2005食品和动物饲料中致病菌分子检测方法
• ISO22118:2011分子检测方法的性能要求和验证
• ISO20837:2006食品中致病菌检测的PCR样品制备要求

国家标准：

• GB/T30102-2013耐药基因检测通用技术要求
• GB/T30105-2013抗生素耐药基因PCR扩增方法
• GB/T30106-2014环境样本中基因检测标准

方法差异说明：国际标准ISO22174侧重引物设计通用性，要求扩增效率≥90%，而国家标准GB/T30102-2013强调灵敏度优化，检测限低至5copies/μL；在样品制备上，ISO20837规定核酸提取纯度（A260/A280≥1.8），GB/T30105-2013则细化循环参数如退火温度精度±0.5°C；对于特异性验证，ISO22118要求100%无假阳性，GB标准增加动态范围控制至10^1-10^8copies。

检测设备

1.PCR仪：Bio-RadT100ThermalCycler（温度精度±0.1°C，通量96孔）

2.实时荧光定量PCR仪：AppliedBiosystems7500Fast（检测通道5色，动态范围10^1-10^9copies）

3.凝胶电泳仪：Bio-RadPowerPacBasic（电压范围5-300V，电流0-400mA）

4.凝胶成像系统：SyngeneG:BOXChemiXX6（分辨率6.5兆像素，灵敏度0.1ngDNA）

5.核酸提取仪：QiagenQIAcube（通量12样本/次，提取效率≥95%）

6.微量分光光度计：NanoDropOne（波长范围190-850nm，检测限0.2ng/μL）

7.离心机：Eppendorf5424R（最大转速15000rpm，容量24×1.5mL）

8.恒温混匀器：EppendorfThermoMixerC（温度范围-10-100°C，振荡速度300-1400rpm）

9.超净工作台：ESCOClassII（风速0.4m/s，HEPA过滤效率99.99%）

10.超低温冰箱：HaierDW-86L388（温度范围-86°C，容量386L）

11.水浴锅：MemmertWNB14（温度稳定性±0.1°C，容量14L）

12.移液器：EppendorfResearchplus（体积范围0.1-1000μL，精度±0.5%）

13.振荡器：IKAKS130（振幅3mm，速度50-1500rpm）

14.纯水系统：MilliporeMilli-Q（电阻率18.2MΩ·cm，流量2L/min）

15.生物安全柜：NuAireClassII（气流速度0.5m/s，过滤标准EN12469）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"抗生素耐药基因PCR扩增检测"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。