检测项目
1.浓度测定:使用紫外分光光度法或荧光法,浓度范围1-1000ng/μL,允许偏差±5%
2.纯度评估:A260/A280比值1.8-2.0为纯DNA,1.9-2.1为纯RNA,偏差±0.1
3.完整性检测:通过琼脂糖凝胶电泳,DNA条带清晰无降解,RNA完整性数(RIN)≥7.0
4.蛋白质污染物检测:A260/A230比值≥2.0,蛋白质浓度≤0.1μg/μL
5.盐分污染物检测:电导率测定值≤10μS/cm,盐浓度≤5mM
6.片段大小分析:DNA片段大小分布100bp-10kbp,偏差±5%
7.荧光定量准确性:使用荧光染料如PicoGreen,检测下限0.1ng/μL,线性范围0.1-1000ng/μL
8.pH值测定:pH范围7.0-8.5,允许偏差±0.2
9.酶抑制物检测:通过qPCR扩增效率评估,效率值90%-110%
10.微生物污染检测:细菌或真菌污染阴性,通过培养或PCR方法确认
11.氧化损伤评估:8-oxo-dG含量测定,阈值≤0.1%总碱基
12.降解程度量化:通过电泳条带强度比,降解指数≤0.2
检测范围
1.血液DNA样品:从全血或血清提取,浓度10-500ng/μL,侧重纯度A260/A280≥1.8
2.组织RNA样品:来自动物或植物组织,RIN值≥7.0,避免降解
3.细胞培养物DNA:培养细胞提取,浓度5-200ng/μL,检测蛋白质污染≤0.05μg/μL
4.质粒DNA:超螺旋结构占比≥90%,浓度50-1000ng/μL,片段大小确认
5.病毒RNA样品:从病毒颗粒提取,浓度1-100ng/μL,完整性通过RT-PCR验证
6.环境DNA样品:土壤或水样提取,浓度0.1-50ng/μL,污染物盐分≤10mM
7.法医样本DNA:低浓度样品0.1-10ng/μL,强调降解指数≤0.3和污染物检测
8.植物基因组DNA:从叶片或种子提取,浓度20-300ng/μL,多糖污染物A260/A230≥1.8
9.细菌基因组DNA:细菌培养提取,浓度10-200ng/μL,检测酶抑制物通过qPCR
10.线粒体DNA:特异性提取,浓度5-100ng/μL,纯度A260/A280≥1.9
11.FFPE组织DNA:福尔马林固定石蜡包埋样品,降解程度较高,评估片段大小≥100bp
12.合成核酸样品:寡核苷酸或引物,浓度100-5000ng/μL,检测盐分和纯度
检测方法
国际标准:
ISO22174:2005分子生物学方法核酸提取和纯化
ISO20395:2018Biotechnology—Requirementsforevaluatingtheperformanceofquantificationmethodsfornucleicacidtargetsequences
ASTME2882-19JianCeGuideforAnalysisofNucleicAcidsbySpectrophotometry
ISO21571:2005Foodstuffs—Methodsofanalysisforthedetectionofgeneticallymodifiedorganismsandderivedproducts—Nucleicacidextraction
ASTME3021-15JianCeGuideforRiskAssessmentinDNATesting
ISO20166:2018Molecularinvitrodiagnosticexaminations—Specificationsforpre-examinationprocessesforformalin-fixedandparaffin-embedded(FFPE)tissue
ASTME3130-18JianCePracticeforDeterminingtheIntegrityofNucleicAcids
ISO17822:2020Invitrodiagnostictestsystems—Nucleicacidamplification-basedexaminationproceduresfordetectionandidentificationofmicrobialpathogens
ASTME3230-19JianCeGuideforNucleicAcidExtraction
ISO20688:2018Biotechnology—Nucleicacidsynthesis—Part1:Generalrequirements
国家标准:
GB/T19495.1-2004转基因产品检测核酸提取部分
GB/T30989-2014核酸定量测定紫外分光光度法
GB/T37872-2019分子生物学检测DNA纯度及完整性评估
GB/T34796-2017核酸浓度测定荧光染料法
GB/T38165-2019人体血液DNA样品质量控制规范
GB/T39769-2021核酸样品中污染物检测方法
GB/T40982-2021核酸检测用引物和探针质量要求
GB/T41366-2022动物组织RNA完整性检测方法
GB/T41871-2022微生物核酸提取纯化技术规范
GB/T42742-2023法医DNA检验样品质量控制
检测设备
1.紫外分光光度计:型号UV-Spec200.波长范围190-800nm,测量精度±0.001Abs,用于A260/A280比值测定
2.荧光分光光度计:型号Fluoro-Quant300.检测范围0.1-1000ng/μL,激发/发射波长适配常见染料如PicoGreen
3.凝胶成像系统:型号GelImage500.分辨率5MP,支持紫外和可见光成像,用于电泳条带分析
4.实时荧光PCR仪:型号qPCR-800.96孔板设计,温度控制精度±0.1°C,用于定量和抑制物检测
5.电泳仪:型号Electro-100.电压范围0-300V,电流0-400mA,支持琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶
6.超微量分光光度计:型号Nano-View200.样品体积0.5-2μL,检测下限0.1ng/μL,用于低浓度样品
7.生物分析仪:型号BioAnalyzer2100.基于微流体技术,自动评估RNA完整性数(RIN)和片段大小
8.离心机:型号Centri-3000.最大转速15000rpm,温度控制4-40°C,用于样品制备和纯化
9.核酸提取仪:型号Extract-400.自动化处理96samples/run,支持多种样本类型,提取效率≥95%
10.酶标仪:型号PlateReader-96.光吸收和荧光检测模式,高通量筛查污染物和浓度