蛋白质酰胺化分析

检测项目

1.脱酰胺率测定：天冬酰胺脱酰胺、谷氨酰胺脱酰胺、单脱酰胺位点、双脱酰胺位点、总脱酰胺比例、批次间差异、储存加速后脱酰胺增量。

2.异构化产物鉴别：琥珀酰亚胺中间体、异天冬氨酸、α-天冬氨酸、β-天冬氨酸、异构化比例、位点特异性异构化、肽段断裂风险。

3.分子大小变异：非还原十二烷基硫酸钠毛细管电泳、分子排阻色谱、聚集体百分率、片段百分率、主峰纯度、重链轻链解离率。

4.电荷异构体分布：阳离子交换色谱、等电聚焦、酸峰比例、碱峰比例、主峰等电点、电荷变异与脱酰胺相关性。

5.疏水性变化：反相超高效液相色谱、保留时间漂移、疏水峰面积、梯度斜率优化、流动相pH筛选。

6.二级结构扰动：圆二色谱、α螺旋含量、β折叠含量、无规卷曲增量、热变性温度、熔融曲线拐点。

7.三级结构完整性：荧光光谱、最大发射波长位移、色氨酸淬灭度、ANS结合荧光、疏水斑块暴露度。

8.糖基化位点脱酰胺：糖肽富集、天冬酰胺糖基化率、脱酰胺后糖链丢失、糖型比例变化、质谱碎片指认。

9.生物活性关联：细胞增殖半最大效应浓度、受体结合解离常数、酶联免疫吸附效价、补体激活能力、中和抗体抑制率。

10.加速稳定性：四十摄氏度二十八天、二十五摄氏度六个月、冻融循环十次、光照四千勒克斯、脱酰胺速率常数、阿伦尼乌斯拟合。

11.制剂缓冲液影响：磷酸盐、醋酸盐、组氨酸、柠檬酸盐、pH五点五至七点五、离子强度梯度、表面活性剂抑制效应。

12.氧化耦合脱酰胺：甲硫氨酸氧化、半胱氨酸氧化、脱酰胺位点邻近氧化、羰基含量、氧化脱酰胺协同指数。

13.聚集倾向评估：静态光散射、动态光散射、浊度曲线、成核期、生长期、聚集体形态原子力显微镜。

14.免疫原性风险：肽段与主要组织相容性复合物结合预测、B细胞表位变化、T细胞增殖实验、抗药抗体阳性率。

15.位点占据率：胰酶切肽图、胞内蛋白酶切、天冬酰胺残基覆盖率、缺失肽段补测、标记肽回收率。

检测范围

1.单克隆抗体：免疫球蛋白G1、免疫球蛋白G2、免疫球蛋白G4、重链恒定区、轻链恒定区、Fc段、Fab段、互补决定区。

2.抗体偶联药物：缬氨酸-瓜氨酸接头、马来酰亚胺-己酰基接头、天冬酰胺邻近接头、药物抗体比值、偶联后脱酰胺增量。

3.融合蛋白：肿瘤坏死因子受体-Fc、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4-Fc、靶头肽-Fc、铰链区脱酰胺敏感位点。

4.疫苗抗原：三聚体重组蛋白、病毒样颗粒、表面刺突蛋白、受体结合域、脱酰胺对中和表位影响。

5.重组酶：组织型纤溶酶原激活剂、葡糖脑苷脂酶、天冬酰胺酶、催化三联体附近脱酰胺、活性中心构象变化。

6.激素类蛋白：胰岛素、胰岛素类似物、生长激素、促卵泡激素、二硫键邻近脱酰胺、生物效价降低。

7.血浆蛋白：白蛋白、凝血因子八、凝血因子九、免疫球蛋白、天冬酰胺糖基化与脱酰胺竞争。

8.细胞因子：干扰素β、白细胞介素-2、粒细胞集落刺激因子、α螺旋区脱酰胺、受体亲和力下降。

9.生物类似药：原研参照、相似性评价、头对头脱酰胺谱、质量属性风险评估、一致性区间统计。

10.冻干粉制剂：甘露醇、蔗糖、海藻糖、精氨酸、甘氨酸、水分残留、玻璃化转变温度、脱酰胺抑制率。

11.液体制剂：预充式注射器、卡式瓶、静脉输注袋、硅油界面、脱酰胺界面催化、蛋白吸附损失。

12.缓释微球：聚乳酸-羟基乙酸共聚物、天冬酰胺微环境酸化、脱酰胺加速、微球表面孔隙率。

13.口服蛋白：肠溶包衣、蛋白酶屏障、脱酰胺增加降解、免疫耐受性、表位暴露风险。

14.组织工程支架：胶原蛋白-蛋白复合支架、脱酰胺影响细胞黏附、释放曲线、支架降解同步性。

15.基因治疗载体：腺相关病毒衣壳蛋白、天冬酰胺脱酰胺对转导效率、衣壳稳定性、中和抗体识别。

检测标准

国际标准：

ISO/TS20436:2021、ICHQ6B、ICHQ5C、ICHQ5E、ASTME2314-03(2020)、ASTME2225-02(2020)、ASTME2691-09(2021)、ASTME2873-13(2021)、ISO10993-15:2019、ISO13098:2015、ISO20034:2019、WHOTRS978Annex4、USP<1050>、USP<129>、EP2.2.56

国家标准：

GB/T37880-2019、GB/T40365-2021、YY/T1449.3-2014、YY/T1183-2010、YY/T1563-2017、GB/T35220-2017、GB/T37849-2019、YY/T1236-2014、GB/T42062-2022、YY/T1567-2017、GB/T16886.15-2003、GB/T25915.3-2010、YY/T1465.1-2015、GB/T28639-2012、YY/T1465.2-2016

检测设备

1.超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用仪：肽图解析、脱酰胺位点定位、质量精度小于二毫原子质量单位、外标法定量、纳升级流速。

2.超高分辨率轨道阱质谱仪：完整蛋白分子量、二硫键配对、脱酰胺后质量偏移、碎片离子覆盖、动态范围十数量级。

3.毛细管电泳-质谱联用系统：电荷异构体分离、在线脱盐、鞘液接口、迁移时间重现性小于百分之二。

4.阴离子交换色谱仪：电荷变体收集、梯度优化、缓冲液在线脱气、柱温十五至六十摄氏度可控。

5.圆二色谱仪：远紫外扫描、近紫外扫描、停流模块、温控范围五至九十摄氏度、波长重复性零点一纳米。

6.傅里叶变换红外光谱仪：酰胺I带拟合、二阶导数处理、温度梯度附件、液氮冷却检测器、信噪比五万比一。

7.荧光分光光度计：三维荧光扫描、偏振检测、自动滴定、淬灭实验、温度跃变附件。

8.差示扫描量热仪：微量热模式、基线重复性小于零点零五毫瓦、升降温速率零点一至二摄氏度每分、密封高压坩埚。

9.动态光散射仪：角度范围十五至一百七十五度、粒径零点三至一万纳米、浓度下限零点一毫克每毫升、自相关函数基线漂移小于百分之零点五。

10.静态光散射仪：多角度检测、德拜图拟合、重均分子量、回旋半径、第二维里系数。

11.分析型超速离心机：沉降速度、沉降平衡、波长扫描、干涉光学、样品体积三十微升。

12.生物层干涉仪：实时结合动力学、解离常数、脱酰胺对抗原结合影响、传感器再生十次以上。

13.表面等离子共振仪：胺基偶联、捕获偶联、再生条件优化、脱酰胺后亲和力变化、基线噪声小于零点一共振单位。

14.高通量微量热泳动仪：溶液内相互作用、荧光标记免标记双模式、样品消耗十微升、解离常数范围皮摩尔至毫摩尔。

15.自动肽合成仪：脱酰胺标准肽制备、天冬酰胺替代肽、同位素标记肽、合成规模零点零五毫摩尔、纯度大于百分之九十五。

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

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