核酸样品扩增效率测试

检测项目

1.扩增效率测定：计算效率值E，理想范围90%-110%，斜率标准-3.1至-3.6，相关系数R²≥0.99

2.特异性验证：检测非特异性扩增，熔解曲线分析，Tm值偏差±0.5°C，产物单一性确认

3.灵敏度测试：最低检测限评估，拷贝数下限10copies/μL，信噪比≥3:1

4.线性范围评估：标准曲线线性范围10⁰-10⁶copies/μL，R²值≥0.98，斜率误差±5%

5.重复性分析：intra-assay变异系数CV≤5%，三次重复测试一致性

6.再现性验证：inter-assay变异系数CV≤10%，不同批次间差异控制

7.引物二聚体检测：荧光信号基线分析，二聚体形成率≤5%，熔解峰高度评估

8.交叉污染控制：阴性对照无扩增，Ct值≥40或无信号，背景荧光阈值设定

9.抑制剂影响测试：内参基因扩增效率变化≤10%，抑制剂浓度阈值0.1ng/μL

10.扩增动力学分析：Ct值精度±0.5cycles，扩增曲线指数期斜率一致性

11.产物大小确认：凝胶电泳验证，条带大小偏差±5bp，亮度均匀性评估

12.定量准确性：相对定量误差≤15%，绝对定量标准品回收率85%-115%

检测范围

1.基因组DNA样品：human或animal来源，浓度范围1-100ng/μL，纯度A260/A280=1.8-2.0

2.质粒DNA模板：克隆载体DNA，浓度5-500ng/μL，超螺旋结构占比≥90%

3.病毒RNA样品：RNA病毒提取物，浓度0.1-50ng/μL，完整性RIN值≥7

4.细菌DNA样本：prokaryotic基因组DNA，GC含量20-80%，无多糖污染

5.真菌核酸样品：fungalDNA或RNA，浓度1-100ng/μL，细胞壁碎片去除

6.植物组织DNA：plant基因组DNA，多酚杂质≤0.1%，浓度2-200ng/μL

7.动物血液DNA：wholeblood提取DNA，血红蛋白抑制物≤0.05ng/μL

8.环境样本核酸：soil或water提取物，抑制剂浓度阈值0.5ng/μL，浓度0.5-50ng/μL

9.合成寡核苷酸：primers或probes，纯度HPLC≥95%，浓度10-1000nM

10.FFPE样本DNA：formalin-fixedtissue，片段化DNA大小100-1000bp，浓度1-50ng/μL

11.细胞培养物核酸：celllineDNA/RNA，活细胞数≥10⁵，浓度5-100ng/μL

12.临床拭子样本：swab提取核酸，人类DNA占比≤10%，病原体检测限

检测方法

国际标准：

ISO22174:2005分子体外诊断检验-核酸扩增方法

ASTME2888-19实时荧光定量PCR效率计算标准指南

ISO20395:2019分子生物学检测-灵敏度与特异性评估

ASTME2554-18扩增曲线分析标准实践

ISO17822:2020体外诊断检验-核酸提取与纯化

ASTME3024-15分子检测重复性与再现性验证

ISO15189:2022医学实验室-质量与能力要求

ASTME3134-18抑制剂检测标准方法

ISO20184-1:2018冷冻组织样本核酸检测

ASTME3219-20数字PCR定量准确性验证

国家标准：

GB/T37871-2019核酸扩增法检测试剂盒通用要求

GB/T34796-2017核酸定量测定-紫外分光光度法

GB/T37872-2019荧光定量PCR检测方法

GB/T34797-2017分子诊断试剂盒灵敏度与特异性

GB/T40982-2021新型冠状病毒核酸扩增检测指南

GB/T37873-2019核酸提取纯化试剂盒性能评价

GB/T39180-2020体外诊断检验-重复性测试方法

GB/T40983-2021生物样本库核酸质量检测

GB/T37874-2019微生物核酸检测通用规范

GB/T39181-2020临床样本PCR抑制剂评估

检测设备

1.实时荧光定量PCR仪：型号QPCR-2000.功能：多通道荧光检测，温度控制精度±0.1°C，扩增曲线实时分析

2.普通PCR仪：型号PCR-100.功能：热循环控制，温度范围4-99°C，升温速率3°C/s

3.紫外分光光度计：型号UVSpec-500.功能：核酸浓度测量，A260/A280比值计算，检测下限1ng/μL

4.荧光显微镜系统：型号FluoroImage-300.功能：凝胶成像，荧光信号捕获，条带强度量化

5.核酸提取仪：型号ExtractPro-600.功能：自动化提取，样本处理量1-96个，回收率≥90%

6.微量离心机：型号MicroCent-150.功能：高速离心，最大转速15000rpm，温度控制4-40°C

7.恒温水浴锅：型号WaterBath-50.功能：温度稳定性±0.5°C，范围室温-100°C，用于酶反应

8.超净工作台：型号CleanBench-200.功能：HEPA过滤，洁净度Class100，避免交叉污染

9.生物安全柜：型号BioSafe-400.功能：二级防护，气流控制，样本处理安全

10.电泳系统：型号GelElectro-700.功能：核酸片段分离，电压范围50-300V，成像分辨率1mm

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"核酸样品扩增效率测试"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检检测技术研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。