检测项目
1.基因编辑效率检测:CRISPR/Cas9靶向编辑成功率≥98%,脱靶率≤0.05%(qPCR/NGS验证)
2.代谢产物浓度测定:目标产物纯度≥99.5%,副产物残留≤50ppm(HPLC-MS/MS)
3.载体稳定性测试:质粒拷贝数变异系数≤5%(连续传代30次)
4.细胞毒性评估:细胞存活率≥90%(MTT法/流式细胞术)
5.生物膜形成能力:OD595值≤0.1(结晶紫染色法)
检测范围
1.基因编辑工具:CRISPR-Cas9系统、TALEN载体、转座子元件
2.工程菌株:大肠杆菌BL21(DE3)、枯草芽孢杆菌168、酵母菌株BY4741
3.合成生物元件:启动子库(T7/lacUV5/Ptet)、核糖体结合位点(RBS)
4.人工合成染色体:最小基因组底盘细胞JCVI-syn3.0
5.生物材料:PLGA纳米载体、壳聚糖基递送系统
检测方法
1.基因测序:ISO/IEC17025:2017体系认证(IlluminaNovaSeq平台)
2.蛋白质表达量测定:GB/T37871-2019(Bradford法/BCA法)
3.代谢流分析:ASTME3134-18(13C同位素标记法)
4.生物安全性评价:GB15193.3-2014急性毒性试验规程
5.抗菌活性测试:ASTME2149-13a动态接触法
检测设备
1.IlluminaNovaSeq6000:高通量测序(单次输出6Tb数据)
2.Agilent1260InfinityIIHPLC:代谢产物分离(分辨率≤1.8μm)
3.ThermoFisherQubit4.0:核酸定量(检测下限0.1pg/μL)
4.BDFACSAriaIII:流式细胞分选(每秒分选25,000个细胞)
5.MalvernZetasizerNanoZS:纳米颗粒表征(粒径范围0.3nm-10μm)
6.PerkinElmerEnVision:微孔板读数(波长范围230-1000nm)
7.EppendorfBioPhotometerD30:OD值测定(精度0.002A)
8.SartoriusBiostatB-DCUII:发酵过程监控(DO控制0.5%)