检测项目

1.病毒粒子形态观察：采用透射电镜分析病毒粒子长度（650-750nm）与直径（18-22nm）

2.核酸序列测定：RT-PCR扩增CP基因片段（目标长度680bp），测序覆盖度≥99.9%

3.抗原蛋白浓度检测：ELISA法测定外壳蛋白含量（灵敏度0.1ng/mL）

4.侵染活性验证：枯斑寄主接种试验（昆诺藜叶片枯斑率≥85%）

5.病毒载量定量：实时荧光定量PCR（Ct值≤35判定阳性）

检测范围

1.田间采集的烟叶样本（包括病斑组织与无症状叶片）

2.烟草种子批次（每批次≥200粒抽样）

3.育苗基质与栽培土壤（500g/样本）

4.蚜虫等传毒媒介（单批次50只虫体）

5.烟用包装材料（滤棒、卷烟纸等接触性材料）

检测方法

ISO17025:2017《植物病毒实验室质控规范》

GB/T28068-2011《烟草病毒检疫鉴定技术规程》

ASTME3066-2017《植物病毒分子检测标准指南》

OEPP/EPPOPM7/139(1)国际植保组织认证方法

NY/T401-2000《烟草病害诊断与防治技术规范》

检测设备

1.HitachiHT7800透射电子显微镜：分辨率0.2nm，配备冷冻超薄切片系统

2.Bio-RadCFX96Touch实时荧光定量PCR仪：支持TaqMan探针法

3.ThermoMultiskanSky全波长酶标仪：具备450nm/650nm双波长检测能力

4.EppendorfCentrifuge5430R高速冷冻离心机：最大转速30,000rpm

5.LeicaCM1950冰冻切片机：切片厚度调节范围1-100μm

6.IlluminaMiSeq基因测序仪：读长2300bp，通量15Gb

7.MiltenyiBiotecGentleMACS组织破碎仪：程序化裂解植物纤维组织

8.SartoriusQuintix224-1CN分析天平：精度0.1mg，符合GLP规范

9.MemmertIPP110培养箱：温度控制精度0.3℃，带CO2调节模块

10.ShimadzuUV-2600i紫外分光光度计：波长范围185-900nm