检测项目

1.病原菌分离培养：采用PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂），培养温度251℃，湿度85%5%，观察菌落形态特征

2.孢子浓度测定：血球计数板法（0.1mm深度），显微镜400倍视野统计孢子密度（单位：CFU/mL）

3.ITS基因序列分析：PCR扩增引物ITS1/ITS4（产物长度500-700bp），测序比对NCBI数据库

4.菌丝生长速率：十字交叉法测量24/48/72小时菌落直径（精度0.1mm）

5.抗药性检测：多菌灵（Carbendazim）梯度浓度法（0.1-100μg/mL），EC50值计算

检测范围

1.桉树叶片病斑样本：采集典型灰褐色轮纹状病斑组织（直径≥5mm）

2.木材腐朽部位：选取树干基部至3m高度范围内的褐色软腐组织

3.苗圃土壤样本：耕作层（0-20cm）土壤孢子密度检测

4.种子带菌检测：千粒种子表面灭菌后PDA平板培养法

5.组培苗污染源：培养基残留物真菌毒素筛查（DON毒素限值≤50ppb）

检测方法

ISO16000-18:2011室内空气微生物采样与分析

GB/T36837-2018植物病害分子生物学检测指南

ASTMD7788-14木材腐朽真菌实验室培养标准

GB/T3543.4-1995农作物种子检验规程发芽试验

SN/T1840-2016植物病原真菌分离培养技术规范

检测设备

ThermoFisherQuantStudio5实时荧光定量PCR仪（96孔板）

LeicaDM500光学显微镜（1000倍油镜观察孢子形态）

MemmertIPP110培养箱（温度精度0.3℃，湿度控制范围30-95%）

SartoriusCP225D电子天平（0.01mg精度）

Bio-RadChemiDocMP凝胶成像系统（化学发光检测）

EppendorfCentrifuge5430R高速冷冻离心机（最大转速30,000rpm）

ESCOAC2-4S1生物安全柜（HEPA过滤器效率99.99%）

MilliporeMilli-QIQ7000超纯水系统（电阻率18.2MΩcm）

ShimadzuLC-20AD高效液相色谱仪（真菌毒素定量分析）

HaierDW-86L626低温保存箱（-40℃样本存储）