检测项目
病毒粒子形态观察:采用透射电镜(TEM)分析病毒粒子形态特征,测量直径范围(18-22nm)及螺旋对称结构
核酸类型鉴定:通过RT-PCR扩增技术测定RNA基因组片段(目标序列:CP基因区段L2684-L3159)
外壳蛋白分子量测定:SDS-PAGE电泳法检测30kDa特异性蛋白条带
血清学反应测试:ELISA法测定OD450值≥0.85判定为阳性反应
寄主接种试验:烟草接种后7天内观察系统性坏死斑出现率≥90%
检测范围
茄科作物:番茄(Solanumlycopersicum)、马铃薯(Solanumtuberosum)块茎及叶片样本
葫芦科作物:黄瓜(Cucumissativus)、西瓜(Citrulluslanatus)维管束组织
观赏植物:菊花(Chrysanthemummorifolium)、康乃馨(Dianthuscaryophyllus)茎秆样本
林木种苗:杨树(Populusspp.)、榆树(Ulmusspp.)根系样本
种子检疫:进口大豆(Glycinemax)、豌豆(Pisumsativum)种子批次抽检
检测方法
ISO16140-3:2021食品链微生物学-病毒检测方法验证规范
GB/T36810-2018植物病毒实时荧光定量PCR检测通则
ASTME3066-16植物病原体免疫测定标准指南
SN/T2123-2021进出境种苗病毒检疫规程
EPPOPM7/113(2)欧洲植物保护组织病毒诊断协议
检测设备
透射电子显微镜JEM-1400Plus:120kV加速电压下进行病毒粒子超微结构观测
实时荧光定量PCR仪ABIQuantStudio5:配置FAM/HEX双通道进行多重靶标扩增
全自动酶标仪BioTekSynergyH1:完成96孔板ELISA反应的吸光度测定
超速离心机BeckmanOptimaXPN-100:实施蔗糖密度梯度离心分离病毒颗粒
核酸提取仪MagCoreHF16:采用磁珠法提取植物组织总RNA
电泳系统Bio-RadPowerPacBasic:进行1.5%琼脂糖凝胶电泳分析
超低温冰箱ThermoScientificTSX60086:-80℃长期保存病毒分离物
生物安全柜EscoAirstreamAC2-4S1:提供BSL-2级病原体操作环境