检测项目

1.病毒滴度测定：采用TCID50法（半数组织培养感染剂量），灵敏度≥10^3TCID50/mL

2.纯度分析：SDS-PAGE电泳法测定蛋白纯度≥95%，HPLC法测定宿主蛋白残留≤0.1%

3.基因组完整性验证：限制性内切酶图谱分析（EcoRI/HindIII），琼脂糖凝胶电泳分辨率≤100bp

4.残留宿主DNA检测：荧光定量PCR法（SYBRGreen），检出限≤10pg/剂

5.复制能力缺陷验证：MRC-5细胞传代培养3代后病毒扩增阴性

检测范围

1.重组腺病毒载体疫苗原液及成品制剂

2.HEK293细胞培养上清及裂解液样本

3.基因治疗产品中的重组腺病毒载体

4.生物制品生产用病毒种子批和工作批

5.临床研究用腺病毒载体注射液中间体

检测方法

ISO21571:2013《分子生物学分析方法验证指南》

GB/T37871-2019《基因治疗产品中病毒载体质量要求》

ASTME2888-19《细胞培养中支原体检测标准指南》

中国药典2020版三部"生物制品病毒安全性检查法"

ISO11737-1:2018《灭菌过程微生物学方法》

检测设备

1.ABIQuantStudio7Pro实时荧光定量PCR仪：用于病毒载量及宿主DNA定量分析

2.Agilent2100生物分析仪：DNA/RNA完整性指数（RIN）测定

3.Bio-RadTC20细胞计数仪：活细胞浓度及存活率测定（精度5%）

4.ThermoNanoDropOne超微量分光光度计：核酸纯度OD260/280比值测定（范围0.1-15000ng/μL）

5.EppendorfCellCultureCO2培养箱：维持37℃0.5℃，CO2浓度5%0.2%

6.BeckmanCoulterCytoFLEX流式细胞仪：病毒转导效率分析（灵敏度<100nm颗粒）

7.WatersACQUITYUPLCH-Class超高效液相色谱仪：蛋白纯度分析（分辨率≤1.7μm）

8.OlympusIX83倒置荧光显微镜：细胞病变效应观察（400放大倍率）

9.SartoriusBIOSTATSTR生物反应器：50L规模病毒扩增培养（DO控制0.1%）

10.MiltenyiBiotecCliniMACSProdigy全自动细胞处理系统：封闭式病毒纯化（回收率≥85%）