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代谢酶活性检测

  • 原创官网
  • 2025-05-31 08:00:16
  • 关键字:北检研究院,代谢酶活性检测

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概述:检测项目 细胞色素P450酶活性: CYP1A2:非那西丁O-脱乙基(产物≥50pmol/mg/min,参照FDA Guidance) CYP2C9:双氯芬酸4'-羟基化(Km≤10μmol/L) CYP3A4:睾酮6β-羟基化(Vmax≥5nmol/min/nmol P450) Ⅱ相代谢酶活性: UGT1A1:β-雌二醇3-葡萄糖醛酸化(IC50偏差±15%) SJianCeT2A1:脱氢表雄酮硫酸化(线性范围0.1-100μM) 酶动力学参数: 米氏常数测定:Km值≤10μmol/L 最大反应速率:

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检测项目

细胞色素P450酶活性:

  • CYP1A2:非那西丁O-脱乙基(产物≥50pmol/mg/min,参照FDA Guidance)
  • CYP2C9:双氯芬酸4'-羟基化(Km≤10μmol/L)
  • CYP3A4:睾酮6β-羟基化(Vmax≥5nmol/min/nmol P450)
Ⅱ相代谢酶活性:
  • UGT1A1:β-雌二醇3-葡萄糖醛酸化(IC50偏差±15%)
  • SJianCeT2A1:脱氢表雄酮硫酸化(线性范围0.1-100μM)
酶动力学参数:
  • 米氏常数测定:Km值≤10μmol/L
  • 最大反应速率:Vmax≥20pmol/min/mg蛋白
体外抑制试验:
  • 可逆抑制:IC50值(精度±0.5log单位)
  • 时间依赖性抑制:kinact/KI(参照FDA DDI指南)
酶诱导评价:
  • CYP3A4诱导倍数:≥2倍(阳性对照利福平)
  • CYP1A mRNA表达量:RT-qPCR Ct值≤35
酶表型分型:
  • CYP2D6探针代谢:右美沙芬O-去甲基化(表型贡献率≥85%)
  • CYP2C19基因型关联:S-美芬妥英4'-羟基化
代谢稳定性:
  • 肝微粒体半衰期:t1/2≥30min(低清除率判定)
  • 固有清除率:Clint≤15μL/min/mg
代谢产物鉴定:
  • Ⅰ/Ⅱ相结合物:LC-MS/MS MRM离子对丰度比≥30%
  • 谷胱甘肽加合物:扫描范围m/z 100-1000
种属差异比较:
  • 人/犬/猴肝微粒体活性比:CYP2C9活性比≥1:0.6:0.8
酶活性定量:
  • 总CYP450含量:≥0.3nmol/mg蛋白(BCA法验证)
  • 还原型辅酶Ⅱ浓度:NADPH≥1mM(340nm吸光度监测)

检测范围

1. 肝微粒体: 人/大鼠/犬/猴来源,重点检测CYP450同工酶特异性活性及种属差异

2. 重组酶系统: Baculovirus/哺乳细胞表达重组CYP/UGT,用于酶动力学及抑制机制研究

3. 肝细胞悬液: 原代肝细胞(冻存/新鲜),评估完整细胞代谢通路及诱导效应

4. S9组分: 含胞浆与微粒体酶,适用Ⅱ相代谢联合反应检测

5. 肝胞质液: 醇/醛脱氢酶(ADH/ALDH)活性检测,乙醇代谢评估

6. 肠道微粒体: CYP3A4/CYP2C9首过代谢研究

7. 血浆酯酶: 丁酰胆碱酯酶(BChE)水解速率测定

8. 脑微血管酶: P-糖蛋白(P-gp)外排功能验证

9. 肿瘤组织酶: 胸苷磷酸化酶(TP)活性与5-FU转化效率

10. 微生物转化体系: 放线菌/真菌对甾体化合物的羟基化能力

检测方法

国际标准:

  • ISO 10993-16:2017 医疗器械药物代谢评价
  • FDA Guidance for Industry: In Vitro Drug Interaction Studies (2020)
  • OECD TG 417 化学物质代谢组学
国家标准:
  • GB/T 35520-2017 化学品 体外肝代谢试验方法
  • YY/T 1295-2015 医疗器械亚慢性毒性代谢产物检测
  • GB/T 27818-2011 化学品 代谢物鉴定质谱方法
(方法差异说明:FDA指南要求CYP抑制试验需≥6浓度点,GB/T 35520允许5浓度点;ISO 10993-16规定医疗器械浸提液需经37℃×72h预处理,而化学品检测采用直接加标法)

检测设备

1. 超高效液相色谱仪: Waters ACQUITY UPLC H-Class(流速范围0.001-2mL/min,柱温4-90℃)

2. 三重四极杆质谱: SCIEX Triple Quad 6500+(质量精度±0.01Da,动态范围>10^6)

3. 酶标仪: PerkinElmer EnVision(检测模式:UV/荧光/发光,温控精度±0.1℃)

4. 超速离心机: Beckman Optima XPN-100(最大转速100,000rpm,g值≥802,000g)

5. 气相色谱仪: Agilent 8890 GC(程序升温速率0.1-120℃/min)

6. 荧光显微镜: Olympus IX83(激发波长365/470/555nm,分辨率0.2μm)

7. 实时荧光定量PCR仪: Bio-Rad CFX96 Touch(温控均一性±0.2℃)

8. 氮吹浓缩仪: Organomation N-EVAP 112(控温范围30-80℃,气流量0-20psi)

9. 细胞培养生物反应器: Eppendorf BioFlo 320(溶氧控制±0.1%,pH波动≤±0.05)

10. 激光共聚焦显微镜: Leica TCS SP8(Z轴分辨率≤0.5μm)

11. 高通量筛选系统: Beckman Biomek i7(移液精度CV≤1%,通量1536孔/日)

12. 微量热泳动仪: NanoTemper Monolith NT.115(检测限100pM-10mM)

13. 等温滴定量热仪: Malvern MicroCal PEAQ-ITC(最小检测热功率0.1μJ/s)

14. 超低温冰箱: Thermo Scientific Forma 900(温度均一性±3℃,-80℃)

15. 激光粒度仪: Malvern Mastersizer 3000(检测范围0.01-3500μm)

北检(北京)检测技术研究院【简称:北检院】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

以上是与"代谢酶活性检测"相关的简单介绍,具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。

服务项目


材料检测服务 专业分析各类金属、非金属材料的成分、结构与性能,提供全面检测报告和解决方案。包括金属材料力学性能测试、高分子材料老化试验、复合材料界面分析等。
化工产品分析 精准检测各类化工产品的成分、纯度及物理化学性质,确保产品质量符合国家标准。服务涵盖有机溶剂分析、催化剂表征、高分子材料分子量测定等。
环境检测服务 提供土壤、水质、气体等环境检测服务,助力环境保护与污染治理,共建绿色家园。包括VOCs检测、重金属污染分析、水质生物毒性测试等。
科研检测认证 凭借专业团队和先进设备,致力于为企业研发、质量控制及市场准入提供精准可靠的技术支撑,助力品质提升与合规发展。