检测项目

细胞色素P450酶活性：

• CYP1A2：非那西丁O-脱乙基（产物≥50pmol/mg/min，参照FDA Guidance）
• CYP2C9：双氯芬酸4'-羟基化（Km≤10μmol/L）
• CYP3A4：睾酮6β-羟基化（Vmax≥5nmol/min/nmol P450）

• UGT1A1：β-雌二醇3-葡萄糖醛酸化（IC50偏差±15%）
• SJianCeT2A1：脱氢表雄酮硫酸化（线性范围0.1-100μM）

• 米氏常数测定：Km值≤10μmol/L
• 最大反应速率：Vmax≥20pmol/min/mg蛋白

• 可逆抑制：IC50值（精度±0.5log单位）
• 时间依赖性抑制：kinact/KI（参照FDA DDI指南）

• CYP3A4诱导倍数：≥2倍（阳性对照利福平）
• CYP1A mRNA表达量：RT-qPCR Ct值≤35

• CYP2D6探针代谢：右美沙芬O-去甲基化（表型贡献率≥85%）
• CYP2C19基因型关联：S-美芬妥英4'-羟基化

• 肝微粒体半衰期：t1/2≥30min（低清除率判定）
• 固有清除率：Clint≤15μL/min/mg

• Ⅰ/Ⅱ相结合物：LC-MS/MS MRM离子对丰度比≥30%
• 谷胱甘肽加合物：扫描范围m/z 100-1000

• 人/犬/猴肝微粒体活性比：CYP2C9活性比≥1:0.6:0.8

• 总CYP450含量：≥0.3nmol/mg蛋白（BCA法验证）
• 还原型辅酶Ⅱ浓度：NADPH≥1mM（340nm吸光度监测）

检测范围

1. 肝微粒体： 人/大鼠/犬/猴来源，重点检测CYP450同工酶特异性活性及种属差异

2. 重组酶系统： Baculovirus/哺乳细胞表达重组CYP/UGT，用于酶动力学及抑制机制研究

3. 肝细胞悬液： 原代肝细胞（冻存/新鲜），评估完整细胞代谢通路及诱导效应

4. S9组分： 含胞浆与微粒体酶，适用Ⅱ相代谢联合反应检测

5. 肝胞质液： 醇/醛脱氢酶（ADH/ALDH）活性检测，乙醇代谢评估

6. 肠道微粒体： CYP3A4/CYP2C9首过代谢研究

7. 血浆酯酶： 丁酰胆碱酯酶（BChE）水解速率测定

8. 脑微血管酶： P-糖蛋白（P-gp）外排功能验证

9. 肿瘤组织酶： 胸苷磷酸化酶（TP）活性与5-FU转化效率

10. 微生物转化体系： 放线菌/真菌对甾体化合物的羟基化能力

检测方法

国际标准：

• ISO 10993-16:2017 医疗器械药物代谢评价
• FDA Guidance for Industry: In Vitro Drug Interaction Studies (2020)
• OECD TG 417 化学物质代谢组学

• GB/T 35520-2017 化学品 体外肝代谢试验方法
• YY/T 1295-2015 医疗器械亚慢性毒性代谢产物检测
• GB/T 27818-2011 化学品 代谢物鉴定质谱方法

检测设备

1. 超高效液相色谱仪： Waters ACQUITY UPLC H-Class（流速范围0.001-2mL/min，柱温4-90℃）

2. 三重四极杆质谱： SCIEX Triple Quad 6500+（质量精度±0.01Da，动态范围>10^6）

3. 酶标仪： PerkinElmer EnVision（检测模式：UV/荧光/发光，温控精度±0.1℃）

4. 超速离心机： Beckman Optima XPN-100（最大转速100,000rpm，g值≥802,000g）

5. 气相色谱仪： Agilent 8890 GC（程序升温速率0.1-120℃/min）

6. 荧光显微镜： Olympus IX83（激发波长365/470/555nm，分辨率0.2μm）

7. 实时荧光定量PCR仪： Bio-Rad CFX96 Touch（温控均一性±0.2℃）

8. 氮吹浓缩仪： Organomation N-EVAP 112（控温范围30-80℃，气流量0-20psi）

9. 细胞培养生物反应器： Eppendorf BioFlo 320（溶氧控制±0.1%，pH波动≤±0.05）

10. 激光共聚焦显微镜： Leica TCS SP8（Z轴分辨率≤0.5μm）

11. 高通量筛选系统： Beckman Biomek i7（移液精度CV≤1%，通量1536孔/日）

12. 微量热泳动仪： NanoTemper Monolith NT.115（检测限100pM-10mM）

13. 等温滴定量热仪： Malvern MicroCal PEAQ-ITC（最小检测热功率0.1μJ/s）

14. 超低温冰箱： Thermo Scientific Forma 900（温度均一性±3℃，-80℃）

15. 激光粒度仪： Malvern Mastersizer 3000（检测范围0.01-3500μm）