DNA解旋酶检测
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2025-05-31 08:27:33
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DNA解旋酶检测概述：检测项目 酶活性检测： 基础解旋速率：每分钟解旋碱基对数（bp/min），反应温度37±0.5℃ ATP水解活性：单位时间内无机磷释放量（μmol/min/mg），参照EN ISO 17025:2017 持续性参数：单次结合事件解旋DNA长度（≥500bp） 动力学参数： 米氏常数：Km值（μM，ATP浓度梯度0.05-10mM） 最大反应速率：Vmax（nmol/s/mg） 催化效率：kcat/Km（s⁻¹M⁻¹×10⁶） 底物特异性： DNA结合常数：Kd值（nM，EMSA法） 链选择性：5'→3
注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外).
CMA/CNAS等证书详情，因时间等不可抗拒因素会发生变更，请咨询在线工程师。
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检测项目
酶活性检测：
- 基础解旋速率：每分钟解旋碱基对数（bp/min），反应温度37±0.5℃
- ATP水解活性：单位时间内无机磷释放量（μmol/min/mg），参照EN ISO 17025:2017
- 持续性参数：单次结合事件解旋DNA长度（≥500bp）
- 米氏常数：Km值（μM，ATP浓度梯度0.05-10mM）
- 最大反应速率：Vmax（nmol/s/mg）
- 催化效率：kcat/Km（s⁻¹M⁻¹×10⁶）
- DNA结合常数：Kd值（nM，EMSA法）
- 链选择性：5'→3'与3'→5'解旋效率比（≥1.8）
- 结构偏好性：双链/三链/四链DNA解旋速率差异（△R≤15%）
- 变性温度：Tm值（DSC测定，升温速率1℃/min）
- 半衰期：55℃活性维持时间（t1/2≥30min）
- 半数抑制浓度：IC50（μM，浓度梯度0.01-100μM）
- 抑制类型判定：竞争性/非竞争性（Lineweaver-Burk分析）
- SDS-PAGE纯度：目标条带占比（≥95%）
- 内切酶残留：超螺旋DNA转化率（≤5%，GB/T 34796-2017）
- 解旋方向性：单向/双向运动判定（滚环扩增法）
- 解旋精确度：错配碱基识别率（≥98%）
- 协同因子影响：解旋速率变化率（±20%）
- 蛋白结合能力：SPR响应值（RU≥50）
- pH适应性：最适pH值（偏差±0.2）
- 离子依赖性：Mg²⁺浓度阈值（1-10mM）
- 批间差异：活性RSD（≤5%）
- 冻融耐受性：三次循环活性损失率（≤10%）
检测范围
1. 重组解旋酶： 大肠杆菌/酵母表达系统制备，重点检测翻译后修饰对持续合成能力的影响
2. 病毒解旋酶： HSV/EJianCe/HCV来源，侧重ATP结合口袋构象变化与抑制剂敏感性
3. 肿瘤相关解旋酶： BLM/WRN/RECQ家族，检测DNA解旋异常导致的基因组不稳定性
4. 古菌极端酶： 高温/高盐环境适应型，验证80℃条件下解旋持续性
5. CRISPR相关酶： Cas3/Cas12a解旋模块，测定R-loop解离效率
6. 线粒体解旋酶： TWINKLE变异体，检测氧化损伤下的功能衰减
7. 诊断用酶试剂： 恒温扩增试剂盒核心组分，验证解旋-扩增耦合效率
8. 纳米孔测序酶： 马达蛋白解旋模块，测定单分子水平解旋速度均一性
9. 植物抗病毒解旋酶： 烟草等作物来源，分析病毒RNA解旋特异性
10. 酶突变文库： 定向进化产物，高通量筛选热稳定性提升≥10℃的变体
检测方法
国际标准：
- ISO 20688-1:2020 核酸解旋酶活性测定-分光光度法
- ASTM E2878-19 解旋酶持续合成能力凝胶电泳分析法
- IUPAC MB-003 酶动力学参数测定指南
- GB/T 37868-2019 DNA解旋酶活性荧光检测法
- GB/T 34796-2017 解旋酶纯度检测规程
- YY/T 1586-2018 体外诊断试剂用酶活性测定
检测设备
1. 实时荧光检测系统： Roche LightCycler 480II（温控精度±0.1℃，激发波长450-580nm）
2. 等温滴定量热仪： MicroCal PEAQ-ITC（检测限0.1μJ，温度范围2-80℃）
3. 圆二色光谱仪： Jasco J-1500（波长范围190-900nm，光谱带宽1nm）
4. 表面等离子共振仪： Biacore 8K（流速范围1-100μL/min，检测限0.1RU）
5. 微量热泳动仪： Monolith NT.Automated（LED功率0-100%，温度精度±0.1℃）
6. 凝胶成像系统： Bio-Rad ChemiDoc MP（像素500万，动态范围4.8OD）
7. 差示扫描量热仪： TA Instruments Q2000（灵敏度0.2μW，升温速率0.01-100℃/min）
8. 高通量酶标仪： Tecan Spark 20M（检测波长200-1000nm，振荡频率300-1500rpm）
9. 超灵敏磷检测仪： Molecular Devices SpectraMax M5e（磷检测限0.1pmol）
10. 单分子荧光系统： Olympus TIRF（时间分辨率10ms，EMCCD量子效率95%）
11. 毛细管电泳仪： Beckman PA800 Plus（电压范围0-30kV，温控±0.1℃）
12. 蛋白纯化系统： GE AKTA pure 25（流速范围0.001-25mL/min，压力上限20MPa）
13. 动态光散射仪： Malvern Zetasizer Ultra（粒径检测范围0.3nm-10μm）
14. 快速停流装置： Applied Photophysics SX20（混合时间1ms，光谱范围200-650nm）
15. 原子力显微镜： Bruker Dimension Icon（分辨率0.1nm，扫描频率0.5-2kHz）
北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】
报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。
检测周期：7~15工作日，可加急。
资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。
标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。
非标测试：支持定制化试验方案。
售后：报告终身可查，工程师1v1服务。
以上是与DNA解旋酶检测相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。