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纯化的蛋白检测

  • 原创官网
  • 2025-06-01 15:43:05
  • 关键字:纯化的蛋白测试案例,纯化的蛋白项目报价,纯化的蛋白测试周期
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纯化的蛋白检测概述:检测项目 纯度检测: SDS-PAGE分析:纯度百分比(≥95%,参照Laemmli法) 高效液相色谱法:主峰面积占比(≥98%,参照USP<621>) 毛细管电泳:迁移时间偏差(±0.1分钟) 浓度检测: BCA法:蛋白质浓度(范围0.1-2000μg/mL,检测限0.05μg/mL) 紫外分光光度法:A280吸光度(消光系数≥1.0cm²/mg) Bradford法:染料结合量(线性范围5-100μg/mL) 活性检测: 酶动力学分析:比活性(≥100U/mg,参照Michaelis-Me


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检测项目

纯度检测:

  • SDS-PAGE分析:纯度百分比(≥95%,参照Laemmli法)
  • 高效液相色谱法:主峰面积占比(≥98%,参照USP<621>)
  • 毛细管电泳:迁移时间偏差(±0.1分钟)
浓度检测:
  • BCA法:蛋白质浓度(范围0.1-2000μg/mL,检测限0.05μg/mL)
  • 紫外分光光度法:A280吸光度(消光系数≥1.0cm²/mg)
  • Bradford法:染料结合量(线性范围5-100μg/mL)
活性检测:
  • 酶动力学分析:比活性(≥100U/mg,参照Michaelis-Menten方程)
  • 细胞增殖试验:ED50值(≤10nM)
  • 配体结合试验:解离常数KD(≤1nM)
结构分析:
  • 圆二色光谱:二级结构比例(α-螺旋≥40%)
  • 核磁共振:化学位移偏差(±0.01ppm)
  • X射线衍射:分辨率(≤2.0Å)
稳定性测试:
  • 加速稳定性试验:降解率(≤5%/月,40°C)
  • 冻融循环测试:活性保留率(≥90%)
  • 热变性分析:Tm值(≥55°C)
杂质检测:
  • 宿主细胞蛋白残留:浓度(≤100ppm,参照ELISA法)
  • 内毒素检测:EU/mg(≤0.1EU/mg,参照LAL法)
  • 核酸残留:浓度(≤10ng/mg)
等电点测定:
  • 等电聚焦电泳:pI值(偏差±0.2)
  • 毛细管等电聚焦:迁移时间一致性(CV≤2%)
分子量测定:
  • 质谱分析:分子量误差(±1Da)
  • 尺寸排阻色谱:保留时间(RSD≤1%)
聚集状态分析:
  • 动态光散射:多分散指数(PDI≤0.2)
  • 静态光散射:分子量分布(Mw/Mn≤1.1)
功能验证:
  • Western blotting:特异性条带强度(信噪比≥10)
  • 免疫沉淀:结合效率(≥80%)

检测范围

1. 重组蛋白: 包括大肠杆菌或哺乳动物细胞表达的蛋白,重点检测纯度和活性,确保无宿主残留。

2. 单克隆抗体: 涵盖IgG1/IgG4亚型,侧重结构完整性和聚集状态,防止聚集体形成。

3. 酶制剂: 如蛋白酶或脱氢酶,核心检测活性和稳定性,保障催化效率。

4. 疫苗用蛋白: 包括抗原蛋白,重点评估纯度和内毒素,确保免疫原性。

5. 诊断试剂蛋白: 如标记抗体或抗原,侧重浓度和功能验证,保证检测灵敏度。

6. 细胞因子: 如IL-2或TNF-α,核心检测生物活性和纯度,防止非特异性结合。

7. 生长因子: 如EGF或VEGF,重点分析浓度和稳定性,确保细胞增殖效应。

8. 融合蛋白: 如Fc融合体,侧重分子量测定和功能测试,验证结构域活性。

9. 肽类: 包括合成肽,核心检测纯度和序列一致性,防止降解。

10. 糖蛋白: 如抗体糖基化变体,重点分析糖型分布和活性,确保翻译后修饰正确。

检测方法

国际标准:

  • ISO 21572:2019 食品中蛋白质检测方法(SDS-PAGE差异:固定凝胶浓度)
  • ASTM E2520-21 蛋白质浓度紫外分光光度法(检测波长差异:280nm vs 260nm)
  • USP<1058> 分析仪器验证(方法验证要求差异:IQ/OQ/PQ步骤)
  • IUPAC 蛋白质纯化指南(杂质检测差异:宿主蛋白限值)
  • EP 2.2.44 毛细管电泳法(分辨率差异:缓冲液pH范围)
国家标准:
  • GB/T 35809-2018 蛋白质纯度测定(SDS-PAGE差异:染色剂类型)
  • GB/T 5009.124-2016 食品蛋白质含量测定(BCA法差异:标准曲线范围)
  • GB/T 34800-2017 蛋白质活性检测(酶动力学差异:底物浓度设置)
  • GB/T 38165-2019 生物制品内毒素检测(LAL法差异:灵敏度阈值)
  • GB/T 39201-2020 重组蛋白分子量测定(质谱差异:校准标准)

检测设备

1. 紫外可见分光光度计: Shimadzu UV-2600i(波长范围190-1100nm,分辨率0.1nm)

2. 高效液相色谱系统: Agilent 1260 Infinity II(流速范围0.001-10mL/min,检测限0.1μg/mL)

3. SDS-PAGE电泳仪: Bio-Rad Mini-PROTEAN Tetra(电压范围50-500V,凝胶尺寸8x10cm)

4. 质谱仪: Thermo Scientific Q Exactive HF-X(分辨率240,000,质量精度±1ppm)

5. 酶标仪: Tecan Spark 20M(检测波长200-1000nm,孔间差±1%)

6. 圆二色光谱仪: Jasco J-1500(波长范围170-2500nm,温度控制±0.1°C)

7. 动态光散射仪: Malvern Zetasizer Pro(粒径范围0.3nm-10μm,温度范围4-90°C)

8. 等电聚焦仪: Bio-Rad PROTEAN i12(pH梯度3-10,分辨率0.01pH)

9. 生物分子相互作用分析仪: Biacore 8K(结合速率检测范围10⁻⁴-10⁷M⁻¹s⁻¹)

10. 蛋白质芯片阅读器: Arrayit SpotBot 3(点样精度±5μm,通量1000点/片)

11. 核磁共振波谱仪: Bruker Avance NEO 600(场强14.1T,分辨率0.001ppm)

12. X射线衍射仪: Rigaku XtaLAB Synergy-S(分辨率≤0.8Å,温度范围-173-300°C)

13. 荧光显微镜: Leica DMi8(激发波长400-700nm,放大倍数1000x)

14. 流式细胞仪: BD FACSAria III(检测速率70,000事件/秒,激光线488nm)

15. 差示扫描量热仪: TA Instruments Q2000(温度范围-90-550°C,灵敏度0.1μW)

北检(北京)检测技术研究院【简称:北检院】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

  以上是与纯化的蛋白检测相关的简单介绍,具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。

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