检测项目

细胞活性检测：

• 活率测定：台盼蓝拒染率（≥95%，参照ISO10993-5）
• 代谢活性检测：CCK-8吸光度值（OD450nm≥1.2）

• 显微形态：纺锤形细胞比例（≥85%，40倍镜检）
• 超微结构：线粒体嵴完整性（透射电镜观察）

• 阳性标记：CD90表达率（≥95%）、CD105阳性率（≥90%）
• 阴性标记：CD45表达率（≤2%）、CD11b缺失率（≤1%）

• 成骨分化：茜素红钙结节定量（钙沉积量≥20μg/mg蛋白）
• 成脂分化：油红O染色阳性率（脂滴面积≥30%）
• 成软骨分化：甲苯胺蓝糖胺聚糖染色（OD620nm≥0.35）

• 核型分析：染色体数目（40±2）、结构异常率（≤5%）
• 基因突变：STR位点匹配度（≥80%）

• 无菌检测：细菌/真菌培养（14天阴性，参照USP<71>）
• 支原体检测：PCR法（DNA条带阴性）

• 迁移能力：Transwell穿膜细胞数（≥200/视野）
• 旁分泌因子：VEGF分泌量（ELISA≥50pg/10⁶cells）

• 杂细胞剔除：血细胞残留计数（≤0.5%）
• 单克隆率：有限稀释法克隆形成（≥70%）

• β-半乳糖苷酶染色：阳性细胞率（≤10%）
• 端粒长度：qPCR相对比值（TRF≥8kb）

• 复苏存活率：DMSO冻存后活率（≥85%）
• 功能保持：分化能力衰减率（≤15%）

检测范围

1.骨髓来源MSCs：重点检测原代分离效率（单核细胞得率≥5×10⁵/g组织）及成骨分化倾向性

2.脂肪来源MSCs：侧重脂滴残留量（油红O阳性≤5%）和血管生成因子表达水平

3.脐带华通胶源MSCs：强化无菌检测（胎盘组织病原体筛查）和增殖速率（PDT≤20h）

4.牙髓来源MSCs：关注神经分化标志物（Nestin阳性率≥60%）及矿化能力

5.传代细胞系：重点监控代次稳定性（P5代核型异常率≤8%）和表型漂移

6.基因修饰MSCs：载体整合位点分析（SouthernBlot）及脱靶效应检测

7.冻存细胞制剂：复苏后功能验证（迁移能力衰减≤10%）及DMSO残留量（HPLC≤0.1%）

8.3D培养产物：球体直径均一性（CV≤15%）及核心细胞活性（Calcein-AM阳性≥80%）

9.外泌体制品：粒径分布（NTA50-150nm）及TSG101蛋白表达

10.支架复合材料：细胞负载率（≥1×10⁶cells/cm³）及材料降解毒性（LDH释放≤10%）

检测方法

国际标准：

• ISO13022:2012医用细胞产品微生物检测
• ASTMF2944-21间充质干细胞表征标准
• USP<1043>细胞治疗产品检定
• Ph.Eur.2.6.27支原体检测方法
• ISCT立场声明（2016）MSCs表面标志物指南

• GB/T39730-2020细胞无菌检测通则
• YY/T0606.25-2014组织工程医疗产品分化功能评价
• GB/T37864-2019细胞染色体畸变检测
• GB/T34798-2017微载体培养细胞计数方法
• 药典四部9207细胞治疗产品检定指导原则

检测设备

1.流式细胞仪：BDFACSAriaIII（配置5激光18色检测，分辨率<2%CV）

2.倒置荧光显微镜：OlympusIX83（60×油镜NA1.42，sCMOS相机）

3.全自动细胞计数器：CountstarIC1000（双荧光通道，CV≤3%）

4.PCR仪：Bio-RadCFX96（温控精度±0.1℃，多色检测）

5.酶标仪：TecanInfiniteM200（波长范围230-1000nm，OD线性R²≥0.999）

6.超速离心机：BeckmanOptimaXPN-100（最大转速100,000rpm，温控±1℃）

7.显微操作仪：EppendorfTransferMan4m（定位精度0.1μm）

8.凝胶成像系统：SyngeneG:BOX（1600万像素，动态范围4.8OD）

9.生物反应器：SartoriusBIOSTATRM（工作体积50mL-2L，DO控制±5%）

10.冷冻干燥机：ChristAlpha1-4（冷阱温度-85℃，真空度<0.01mbar）

11.纳米粒径仪：MalvernZetasizerUltra（检测范围0.3nm-10μm）

12.电化学工作站：CHI660E（扫描速率0.001-10000V/s）

13.CO2培养箱：ThermoForma3111（温度波动±0.2℃，CO2控制±0.1%）

14.低温存储系统：Taylor-WhartonCryoPlus9000（液氮维持-196℃±2℃）

15.高通量测序仪：IlluminaNovaSeq6000（通量6Tb/run，Q30≥85%）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

　　以上是与小鼠间充质干细胞检测相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。