检测项目
基因表达分析:
- 单细胞RNA测序:基因计数(TPM≥1,参照10xGenomics标准)、差异表达识别(log2FC≥2,p值<0.05)
- 转录组覆盖度:基因检出数≥2000/cell,UTR覆盖率≥85%
- 表面蛋白标记:阳性细胞比例≥95%(使用PE-Cy7荧光标记)
- 细胞内蛋白定量:MFI值≥1000(参照流式细胞术标准)
- 磷酸化蛋白检测:激活状态阈值(磷酸化位点≥50%)
- 细胞尺寸检测:直径范围5-20μm(CV≤10%)
- 核质比测定:N/C比率0.3-0.7(参照显微成像标准)
- 形状复杂度:不规则度指数≥1.5
- ATP水平检测:浓度≥1nM(荧光素酶法)
- 糖酵解速率:乳酸产量≥0.5nmol/cell/h
- 相位分布:G0/G1期占比40-60%,S期≥20%(PI染色法)
- 增殖指数:Ki-67阳性率≥30%
- 单核苷酸变异:变异等位基因频率≥0.1%(参照WGS标准)
- 拷贝数变异:CNV幅度≥0.5倍
- T细胞亚群分型:CD4+/CD8+比率1.5-2.5
- 细胞因子分泌:IFN-γ产量≥50pg/cell
- 存活率检测:≥90%(Calcein-AM染色)
- 凋亡指数:AnnexinV阳性率≤10%
- 迁移能力:划痕愈合率≥80%/24h
- 侵袭潜能:Transwell细胞数≥100/孔
- 细胞间通讯:配体-受体对≥50对(scRNA-seq推断)
- 代谢物交换:摄取率≥5nmol/cell/h
检测范围
1.肿瘤细胞:涵盖实体瘤和血液瘤样本,重点检测驱动基因突变和克隆异质性
2.免疫细胞:包括T细胞、B细胞和NK细胞,评估活化状态和细胞因子谱
3.干细胞:多能干细胞和成体干细胞,侧重分化潜能和转录因子表达
4.神经元细胞:脑组织和类器官源,检测突触连接和电生理活性
5.上皮细胞:皮肤和肠道样本,关注屏障功能和粘附分子表达
6.内皮细胞:血管组织来源,重点分析血管生成能力和渗透性
7.间质细胞:成纤维细胞和基质细胞,检测细胞外基质分泌和炎症响应
8.生殖细胞:精子和卵母细胞,侧重染色体完整性和受精能力
9.病原体感染细胞:病毒或细菌宿主细胞,评估感染负荷和免疫逃逸机制
10.药物处理细胞:体外模型细胞,检测治疗响应和耐药性发展
检测方法
国际标准:
- ISO20391-1:2018细胞计数和活力测定方法
- ISO10993-5:2009体外细胞毒性试验
- ISO15189:2012医学实验室质量和能力要求
- ISO17025:2017检测和校准实验室能力通用要求
- GB/T16886.5-2017医疗器械生物学评价第5部分:体外细胞毒性试验
- GB/T39769-2021单细胞转录组测序技术规范
- GB/T39JianCe-2020纳米材料细胞毒性试验方法
- GB/T37864-2019生物样本库质量和能力通用要求
检测设备
1.流式细胞仪:BDFACSAriaIII(流速0.5-10μL/min,检测通道18个)
2.单细胞测序平台:10xGenomicsChromium(通量10000细胞/run,读长150bp)
3.共聚焦显微镜:LeicaTCSSP8(分辨率0.2μm,激光波长405-640nm)
4.高通量成像系统:PerkinElmerOperaPhenix(扫描速度0.5s/孔,Z轴范围100μm)
5.微流控芯片系统:FluidigmC1(单细胞捕获效率≥90%,集成96样品)
6.细胞活力分析仪:ThermoFisherCountessII(检测限1-106细胞/mL,精度±2%)
7.PCR扩增仪:Bio-RadCFX96(温度梯度0.1°C,循环数40步)
8.质谱仪:ThermoScientificQExactive(分辨率70000,质量范围50-6000m/z)
9.电生理记录系统:MolecularDevicesAxon(采样率10kHz,噪声≤10pA)
10.细胞培养箱:ThermoForma3110(温度控制37±0.5°C,CO2浓度5±0.1%)
11.离心机:Eppendorf5430R(转速范围100-30000rpm,RCF≥20000g)
12.分选仪:SonySH800(分选纯度≥98%,速度25000细胞/s)
13.酶标仪:BioTekSynergyH1(检测波长200-999nm,灵敏度0.001OD)
14.低温存储箱:ThermoRevcoJianCeT(温度-80°C,稳定性±1°C)
15.核酸提取器:QiagenQIAcube(提取效率≥95%,处理样本96个/批次)