检测项目
RNA提取质量控制：
- RNA浓度：检测限2-15000ng/μl，纯度OD260/280比值1.8-2.0
- RNA完整性：RIN值≥7.0（参照Agilent2100标准）
- cDNA产量：定量范围5-500ng，效率偏差≤5%
- 引物特异性：解链温度Tm值60-65°C
- Ct值：检测范围10-40循环，线性动态范围5logs
- 扩增效率：90-110%，R²值≥0.98
- 熔解曲线分析：单峰检测，峰宽≤1°C
- 非特异性扩增：阴性对照Ct值≥35
- 检测限LOD：1copy/μl，定量限LOQ：5copies/μl
- 背景噪声：荧光信号强度≤100RFU
- 批内变异系数CV：≤5%，批间CV≤10%
- 回收率：85-115%
- 斜率：-3.1至-3.6，截距范围-5至5
- 线性范围：R²≥0.99
- 表达稳定性：M值≤0.5，geNorm算法
- 内参Ct值变异：SD≤0.5
- foldchange：对数转换值|log2FC|≥1
- p值：≤0.05，t检验或ANOVA
- 相对表达量：ΔΔCt方法计算，单位foldchange
- 质量控制参数：通过率≥95%
检测范围
1.人类血清样本：检测循环miRNA作为癌症生物标志物，重点评估样本稳定性和低丰度RNA提取
2.肿瘤组织样本：分析FFPE或新鲜组织中miRNA表达谱，侧重肿瘤特异性miRNA差异检测
3.细胞培养上清液：外泌体miRNA检测，强调外泌体分离纯化和表达一致性
4.脑脊液样本：神经疾病相关miRNA定量，重点处理低体积样本和高背景干扰
5.尿液样本：非侵入性miRNA检测，侧重尿液保存条件和抑制剂去除
6.全血样本：全血RNA中miRNA表达，重点红细胞裂解和RNA稳定性控制
7.福尔马林固定石蜡包埋组织：FFPE样本miRNA提取优化，检测重点为RNA碎片化补偿
8.植物组织样本：植物miRNA研究，侧重多酚和多糖干扰去除
9.动物模型样本：疾病模型miRNA表达分析，重点跨物种一致性验证
10.微生物样本：细菌或病毒miRNA检测，检测重点为高GC含量RNA处理
检测方法
国际标准：
- MIQE2020实时荧光定量PCR实验最小信息指南（强调实验设计细节报告）
- ISO20395-2019生物样本中核酸定量方法（侧重灵敏度验证）
- GB/T30988-2014微小RNA检测技术规范（侧重临床样本处理）
- GB/T37871-2019分子生物学检测通用要求（强调数据分析标准）
检测设备
1.分光光度计：Nanodrop2000（波长范围190-840nm，精度±0.001OD）
2.离心机：Eppendorf5424R（转速范围100-15000rpm，温度控制-10至40°C）
3.实时荧光定量PCR仪：Bio-RadCFX96（检测通道6个，温度精度±0.1°C）
4.热循环仪：AppliedBiosystemsVeriti（温度范围4-99°C，升温速率5°C/s）
5.电泳系统：Bio-RadPowerPacBasic（电压范围10-300V，电流0-400mA）
6.核酸提取仪：QIAcube（通量1-12样本，提取效率≥95%）
7.恒温培养箱：MemmertIN110（温度范围室温至60°C，稳定性±0.5°C）
8.超低温冰箱：ThermoScientificTSX（温度-86°C，容量700L）
9.移液器：EppendorfResearchplus（量程0.1-1000μl，精度±0.5%）
10.显微镜：OlympusBX53（放大倍数40-1000x，分辨率0.2μm）
11.外泌体分离系统：qEVoriginal（粒径分离范围50-200nm，回收率≥80%）
12.荧光显微镜：NikonEclipseTi（激发波长400-700nm，检测灵敏度0.1ng）
13.恒温混匀仪：EppendorfThermoMixer（转速300-1400rpm，温度4-99°C）
14.纯水系统：Milli-QIntegral（电阻率18.2MΩ·cm，TOC≤5ppb）
15.数据分析软件：CFXMaestro（算法支持ΔΔCt计算，兼容MIQE报告）