检测项目
核酸分析:
- DNA片段大小:迁移距离 vs 标准品(参照GB/T 34797-2017)
- RNA完整性:28S/18S rRNA比值(≥1.8)
- 浓度测定:荧光强度线性范围(1ng-1μg)
- 分子量测定:迁移率 vs Marker(精度±2kDa)
- 纯度评估:单一条带占比(≥95%)
- 亚基组成:还原/非还原条件差异
- 蛋白质杂质:杂带数量(≤3条)
- 核酸污染:溴化乙锭荧光强度(OD260/280=1.8-2.0)
- 条带光密度:灰度值线性范围(0.1-3.0OD)
- 相对丰度:目标条带占比(±5%)
- 限制性酶切效率:完全消化条带数量
- 片段分布:预期片段大小偏差(≤5bp)
- 抗原特异性:单一条带验证
- 交叉反应:非特异结合率(≤5%)
- 等电点测定:pH梯度精度(±0.01pH)
- 电荷异质性:主峰占比(≥90%)
- 迁移时间重现性:RSD(≤1.5%)
- 峰面积积分:相对标准偏差(≤2.0%)
- SDS-PAGE解聚程度:二硫键还原验证
- 尿素浓度优化:条带锐度(半峰宽≤0.5mm)
- 标准曲线拟合:R²(≥0.99)
- 未知样品误差:实测值vs理论值(±3%)
检测范围
1. 生物样本: 动植物组织DNA/RNA提取物,重点检测降解程度及抑制剂残留
2. 临床样本: 血清蛋白质组学样品,侧重低丰度蛋白检测限(≥0.1ng)
3. 重组蛋白: 基因工程表达产物,验证分子量准确性及聚合体含量(≤5%)
4. 核酸疫苗: 质粒DNA超螺旋比例(≥90%),宿主RNA残留(≤1μg/mg)
5. 抗体药物: 轻重链比例(1:1±0.1),片段化杂质(≤3%)
6. 食品基质: 转基因成分筛查,检测35S启动子/NOSt终止子(LOQ=0.01%)
7. 环境样本: 微生物群落16S rRNA多样性,焦点片段长度(V3-V4区≈550bp)
8. 法医物证: STR分型检测,等位基因分辩率(±1bp)
9. 病毒载体: AAV空壳率检测(≤30%),基因组完整性
10. 酶制剂: 同工酶谱分析,活性条带比活(≥100U/mg)
检测方法
国际标准:
- ISO 22160:2021 微生物鉴定用脉冲场凝胶电泳法
- ISO 21572:2019 食品转基因成分检测-蛋白质电泳法
- IEC 62321-8:2017 电子电气产品有害物质检测-毛细管电泳法
- GB/T 34797-2017 核酸纯化产物电泳鉴定通则
- GB/T 40367-2021 蛋白质纯度测定 电泳法
- GB 5009.279-2023 食品中转基因成分毛细管电泳检测
检测设备
1. 凝胶成像系统: Bio-Rad ChemiDoc MP(检测限0.1ng EthBr,像素500万)
2. 毛细管电泳仪: Agilent 7100(电压范围1-30kV,温控±0.1℃)
3. 脉冲场电泳槽: CHEF-DR III(角度切换110-150°,电场强度6V/cm)
4. 垂直电泳槽: Hoefer SE600(凝胶尺寸18×16cm,最大电压500V)
5. 水平电泳槽: Sub-Cell GT(琼脂糖凝胶容量200mL,电极间距10cm)
6. 等电聚焦仪: Bio-Rad Protean i12(pH梯度3-10,聚焦电压8000V)
7. 电泳电源: EPS 601(输出3000V/400mA,恒压/恒流模式)
8. 激光密度仪: GE ImageQuant 800(灰度动态范围4.0OD,分辨率50μm)
9. 全自动电泳仪: Helena SQIDlite(样本通量36个/批,CV≤2.5%)
10. 双向电泳系统: Ettan IPGphor III(第一向24cm胶条,第二向26×20cm胶)
11. 芯片电泳仪: Agilent 2100 Bioanalyzer(样本量1μL,DNA灵敏度5pg/μL)
12. 荧光扫描仪: Typhoon FLA 9500(激光波长488/633nm,PMT增益动态范围106)
13. 真空干胶机: Hoefer GD2000(温度范围30-80℃,真空度-0.8MPa)
14. 电转移仪: Trans-Blot Turbo(最大电流2.5A,转印时间7min)
15. 凝胶切割器: BIOPSY Punch(孔径1-5mm,定位精度0.1mm)