代谢通路分析

检测项目

代谢物浓度分析：

• 糖酵解通路代谢物：葡萄糖浓度（0.1-100mmol/L）、乳酸浓度（0.05-50mmol/L，参照ISO 15197）
• 三羧酸循环中间产物：柠檬酸浓度（0.01-10mmol/L）、琥珀酸浓度（0.005-5mmol/L）
• 核苷酸代谢物：ATP浓度（0.1-100μmol/L）、NAD+浓度（0.01-10μmol/L）

酶活性检测：

• 糖代谢关键酶：己糖激酶活性（≥5U/mg蛋白质）、丙酮酸激酶活性（≥3U/mg蛋白质）
• 氧化磷酸化酶：细胞色素C氧化酶活性（≥1.2U/mL）、ATP合酶活性（≥0.8U/mL）
• 解毒通路酶：谷胱甘肽S转移酶活性（≥0.5U/mg蛋白质，参照ASTM E2523）

基因表达量化：

• 代谢调控基因：PPARγ表达量（fold change≥2.0）、SIRT1表达量（fold change≥1.5）
• 信号通路基因：mTOR表达量（fold change≥1.8）、AMPK表达量（fold change≥1.6）
• 炎症相关基因：NF-κB表达量（fold change≥2.2）

蛋白质组学分析：

• 代谢酶蛋白水平：己糖激酶丰度（≥100ng/μL）、丙酮酸脱氢酶丰度（≥80ng/μL）
• 信号转导蛋白：Akt磷酸化水平（≥150%对照）、ERK磷酸化水平（≥120%对照）

通路映射与通量分析：

• 糖酵解通量：葡萄糖消耗率（≥0.5μmol/min/mg）、乳酸生成率（≥0.3μmol/min/mg）
• 脂肪酸氧化通量：棕榈酸消耗率（≥0.2μmol/min/mg）、乙酰辅酶A生成率（≥0.1μmol/min/mg）

同位素标记实验：

• 13C葡萄糖追踪：标记效率（≥95%）、代谢物富集度（≥90%）
• 15N氨基酸追踪：氮周转率（≥0.8h⁻¹）

细胞代谢状态评估：

• 耗氧率（OCR）：基础OCR（≥50pmol/min）、最大OCR（≥100pmol/min）
• 胞外酸化率（ECAR）：基础ECAR（≥20mpH/min）、糖酵解能力（≥40mpH/min）

药物影响分析：

• 抑制剂响应：IC50值（≤10μM）、EC50值（≤5μM）
• 激活剂效果：最大效应（≥150%对照）

代谢组学数据整合：

• 主成分分析（PCA）：方差解释率（≥70%）、聚类显著性（p<0.05）
• 路径分析：富集分数（≥2.0）、通路影响值（≥1.5）

质量控制参数：

• 样本稳定性：降解率（≤5%/24h）、回收率（≥95%）
• 检测重复性：RSD（≤5%）

检测范围

1. 哺乳动物细胞培养样品： 涵盖HEK293、HepG2等细胞系，重点检测糖酵解通路活性和线粒体功能变化。

2. 组织匀浆样本： 包括肝脏、肌肉等哺乳动物组织，侧重脂质代谢物浓度和氧化应激酶活性分析。

3. 血清/血浆样本： 适用于临床诊断样本，核心检测血糖、乳酸及炎症代谢物水平。

4. 尿液生物流体样本： 针对肾脏代谢评估，重点分析有机酸浓度和氨基酸排泄率。

5. 微生物培养物： 如大肠杆菌、酵母菌，检测中心碳代谢通量和生长速率相关性。

6. 植物提取物样本： 涵盖水稻、拟南芥等，侧重光合作用相关代谢物和次生代谢产物定量。

7. 冷冻保存生物样本： 包括液氮冻存细胞或组织，检测冻融过程对代谢物稳定性的影响。

8. 环境微生物样本： 如土壤或水体细菌群落，核心评估氮循环通路和污染物降解代谢。

9. 肿瘤组织样本： 针对癌症研究，重点检测Warburg效应相关代谢物和基因表达异常。

10. 药物处理体外模型： 包括肝微粒体或细胞共培养系统，检测药物代谢酶活性和毒性代谢产物累积。

检测方法

国际标准：

• ISO 15189:2022 医学实验室质量和能力要求（涵盖代谢物检测精度控制）
• ASTM E2523-13 酶活性测定标准方法（规定反应缓冲液pH和温度范围）
• ISO 17025:2017 检测和校准实验室能力通用要求（适用于高通量质谱分析质量控制）
• CLSI EP17-A2 临床实验室方法学评价指南（涉及代谢物定量限和检测限确定）

国家标准：

• GB/T 27404-2008 实验室质量控制规范（要求代谢物回收率≥95%）
• GB/T 29881-2013 生物样品中代谢物测定方法通则（规定样本前处理流程）
• GB/T 32465-2015 基因表达分析检测方法（指定RT-qPCR引物设计和扩增条件）
• GB/T 35811-2018 蛋白质组学分析技术要求（涵盖酶联免疫吸附测定标准）

（方法差异说明：国际标准如ISO 15189强调临床样本溯源，而国家标准GB/T 27404更侧重实验室内部质量控制；ASTM酶活性测定使用Tris缓冲液体系，GB/T方法采用磷酸盐缓冲液，pH稳定性存在±0.2差异；ISO 17025要求设备校准频率更高，GB/T标准允许较长校准间隔。）

检测设备

1. 液相色谱质谱联用仪： 标准型号（质量精度≤2ppm，流速范围0.1-1mL/min）

2. 气相色谱质谱仪： 通用型号（检测限达0.1pg，柱温范围40-400°C）

3. 实时荧光定量PCR仪： 高性能型号（动态范围10⁶，升温速率4°C/s）

4. 酶标仪： 多模式型号（波长范围200-1000nm，精度±1%）

5. 细胞代谢分析仪： 精密型号（OCR分辨率≤2pmol/min，ECAR分辨率≤0.5mpH/min）

6. 紫外可见分光光度计： 双光束型号（波长精度±0.5nm，吸光度范围0-3.0）

7. 离心机： 高速低温型号（转速≥20000rpm，温度控制±0.1°C）

8. 超低温冰箱： 存储专用型号（温度范围-86°C，稳定性±1°C）

9. 生物反应器： 发酵控制型号（pH控制±0.05，溶氧监测精度±0.5%）

10. 显微镜成像系统： 共聚焦型号（分辨率≤0.2μm，荧光通道≥4个）

11. 蛋白质印迹系统： 电泳专用型号（电压范围50-300V，转移效率≥95%）

12. 核磁共振波谱仪： 高场型号（磁场强度≥600MHz，灵敏度≥500:1）

13. 流式细胞仪： 多激光型号（检测速率≥10000cell/s，通道数≥10）

14. 同位素比率质谱仪： 精密型号（δ13C精度±0.1‰，进样量≥1μg）

15. 自动化样本处理工作站： 高通量型号（通量≥96样本/小时，移液精度±0.5μL）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"代谢通路分析"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。