Western Blot检测

检测项目

样品制备检测：

• 蛋白质浓度：Bradford法（范围0.1-1.5μg/μL）
• 样品纯度：A260/A280比（≥1.8，参照ISO 21572）
• 变性效率：SDS结合率（≥95%）

电泳分离检测：

• 分离分辨率：条带宽度（≤1mm，参照GB/T 30435）
• 分子量校准：Marker偏差（±2%）
• 运行稳定性：电压波动（≤5%）

转膜效率检测：

• 转膜完整性：蛋白转移率（≥90%）
• 膜类型验证：PVDF膜孔径（0.45μm）
• 缓冲液兼容性：pH稳定性（7.2-7.6）

阻断处理检测：

• 阻断均匀性：覆盖度（100%）
• 非特异性结合：背景信号强度（≤5%）
• 封闭剂浓度：BSA用量（5%）

一抗孵育检测：

• 抗体特异性：交叉反应率（≤1%）
• 孵育时间：温度控制（4°C±1°C）
• 稀释倍数：工作浓度（1:1000）

二抗孵育检测：

• 结合效率：信号增强因子（≥10x）
• 荧光标记验证：激发波长（依标记而定）
• 洗涤严格性：TBST用量（3x5min）

信号检测分析：

• 发光强度：动态范围（104-106RLU）
• 灵敏度阈值：检测限（0.1pg）
• 线性范围：R²值（≥0.98）

背景控制检测：

• 噪音水平：信噪比（≥20:1）
• 膜清洁度：残留物检测（无可见杂质）
• 曝光时间优化：饱和点控制（≤30s）

标准化验证检测：

• 内参蛋白一致性：β-actin表达（CV≤10%）
• 重复性测试：变异系数（≤5%）
• 定量精度：相对误差（±10%）

特异性确认检测：

• 交叉验证：阴性对照信号（≤背景值）
• 分子量匹配：条带位置偏差（±5kDa）
• 抗体验证：Western Blot vs ELISA一致性（≥95%）

检测范围

1. 细胞裂解物： 检测重点：目标蛋白表达水平变化分析，确保样品均一性和蛋白质降解控制。

2. 组织匀浆： 检测重点：复杂组织基质中的蛋白分离效率，优化裂解缓冲液配比。

3. 血清样品： 检测重点：高丰度蛋白干扰排除，针对低丰度靶蛋白的信号放大。

4. 纯化蛋白质： 检测重点：重组蛋白纯度验证和分子量确认。

5. 病毒颗粒提取物： 检测重点：病毒衣壳蛋白特异性检测，避免宿主蛋白交叉反应。

6. 细菌提取物： 检测重点：内毒素影响评估和蛋白溶解性分析。

7. 植物粗提物： 检测重点：色素干扰消除和酚类化合物去除。

8. 动物组织切片： 检测重点：固定组织蛋白抗原性保存和切片厚度控制。

9. 临床体液样本： 检测重点：生物标志物定量精度和样本稳定性验证。

10. 重组表达系统： 检测重点：表达载体诱导效率和翻译后修饰分析。

检测方法

国际标准：

• ISO 21572:2019 蛋白质免疫印迹检测方法
• ISO 20644:2018 生物样品电泳分离通用要求

国家标准：

• GB/T 30435-2013 蛋白质电泳检测技术规范
• GB/T 38165-2019 免疫印迹法检测标准

方法差异说明：ISO标准优先使用化学发光检测系统，要求动态范围≥105，而GB标准允许ECL和荧光双模式，强调缓冲液pH公差±0.2；ISO电泳参数基于恒定电流，GB允许电压切换模式。

检测设备

1. 电泳仪： Bio-Rad Mini-PROTEAN Tetra System（电压范围：50-300V，精度±1V）

2. 转膜装置： Thermo Scientific iBlot 2 Dry Blotting System（转印时间：7min，膜类型兼容PVDF/NC）

3. 成像系统： GE Amersham Imager 600（分辨率：10μm，动态范围：106）

4. 分光光度计： NanoDrop 2000c（波长范围：190-840nm，样品体积：1μL）

5. 温控摇床： Grant Bio PMS-1000（温度范围：4-60°C，振荡速度：50-300rpm）

6. 离心机： Eppendorf Centrifuge 5425（转速范围：100-15000rpm，转子容量：24x1.5mL）

7. 微量移液器： Gilson Pipetman L（量程：0.1-1000μL，精度±0.5%）

8. 孵育箱： Memmert INC108（温度稳定性：±0.5°C，湿度控制：30-80%）

9. 化学发光检测仪： LI-COR Odyssey Fc（检测限：0.01pg，曝光时间：1s-10min）

10. 凝胶成像分析软件： Image Lab 6.1（定量算法：Volume Tool，兼容TIFF/JPEG）

11. 电泳电源： PowerPac Basic（输出功率：300W，电压精度：±0.1%）

12. 膜阻断盒： Rocker Shaker RS-24（角度调整：0-30°，容量：24膜）

13. 洗涤槽： Polypropylene Trays（尺寸：20x20cm，材质：化学惰性）

14. 样品加热器： Dry Bath Incubator DB-1（温度范围：25-100°C，模块兼容性：0.5/1.5mL）

15. 缓冲液配制系统： pH Meter PB-11（精度：±0.01pH，校准自动）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"Western Blot检测"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。