菌株原始种子补料分批分析

检测项目

培养特性分析：

• 细胞生长动力学：活细胞密度（VCD，cells/mL）、比生长速率（μ，h⁻¹）、倍增时间（DT，h）
• 代谢活性：摄氧率（OUR，mmol/L/h）、二氧化碳释放率（CER，mmol/L/h）
• 营养消耗：葡萄糖浓度（g/L）、谷氨酰胺浓度（mM）、磷酸盐浓度（mM）

代谢产物检测：

• 抑制性代谢物：乳酸浓度（g/L，参照USP<1046>）、氨浓度（mmol/L）
• 目标产物：目标蛋白表达量（mg/L）、质粒拷贝数（PCN/cell）
• 氨基酸谱分析：18种必需氨基酸浓度（μM，HPLC法）

理化参数监测：

• 培养环境：pH值（范围6.8-7.2）、溶氧（DO，%饱和度）、渗透压（mOsm/kg）
• 补料控制：补料速率（mL/L/h）、补料成分偏差（±5%）

遗传稳定性验证：

• 质粒稳定性：传代后保留率（≥95%，参照EP5.2.12）
• 基因序列：目的基因PCR验证（引物特异性检测）、限制性酶切图谱

微生物学质控：

• 无菌检查：14天液体培养基培养（EP2.6.1）
• 支原体检测：DNA荧光染色法（EP2.6.7）
• 内毒素：鲎试剂法（LAL，<0.25EU/mL，USP<85>）

细胞活力评估：

• 活率检测：台盼蓝拒染率（≥90%）
• 凋亡分析：AnnexinV/PI双染（流式细胞术）

产物质量属性：

• 蛋白纯度：SDS-PAGE（纯度≥98%）、SEC-HPLC（单体含量≥95%）
• 生物学活性：细胞增殖抑制试验（IC50偏差≤15%）

残留物分析：

• 抗生素残留：β-内酰胺类ELISA（≤0.01IU/dose）
• 宿主蛋白残留：CHOHCPELISA（≤100ppm）

病毒安全性：

• 外源病毒因子检测：体外接种法（EP5.2.3）
• 逆转录病毒：PG-PCR法（检测限10拷贝/μgDNA）

工艺一致性：

• 批次间变异：关键参数RSD（≤5%，n=5批次）
• 代谢通量模型：代谢物比值（乳酸/葡萄糖≤1.8mol/mol）

检测范围

1.重组蛋白工程菌：大肠杆菌BL21(DE3)、酵母GS115系统，重点检测诱导后产物表达稳定性及包涵体形成率

2.疫苗生产菌株：减毒沙门氏菌Ty21a、重组乙肝疫苗CHO细胞，侧重空斑形成单位（PFU）及抗原表位完整性

3.工业酶制剂菌种：枯草芽孢杆菌、黑曲霉，核心检测比酶活（U/mg）及热稳定性（55℃残留酶活≥80%）

4.益生菌原始种子：双歧杆菌、乳酸杆菌，要求活菌数≥1×10¹⁰CFU/mL及耐胃酸试验（pH2.0存活率≥50%）

5.次级代谢产物菌株：青霉素产黄青霉、红霉素红色糖多孢菌，检测前体苯乙酸利用效率及产物效价（μg/mg）

6.基因治疗载体种子：AAV生产HEK293细胞，关键检测载体基因组滴度（vg/mL）及空壳率（≤20%）

7.诊断试剂用杂交瘤：鼠源杂交瘤细胞，重点监控抗体亲和常数（Ka≥10⁸L/mol）及交叉反应率（≤0.1%）

8.固氮菌农业菌剂：根瘤菌属，核心检测结瘤效率（≥80%）及乙炔还原活性（nmolC₂H₄/mgprotein/h）

9.环境修复工程菌：石油降解假单胞菌，要求降解酶基因表达量（RT-qPCRCt值≤25）及原油降解率（7天≥60%）

10.细胞治疗用干细胞：MSC间充质干细胞，侧重多向分化能力（成骨/脂化验证）及表面标志物（CD105+≥95%）

检测方法

国际标准：

• ISO21528-2:2017肠杆菌科计数（MPN法）
• USP<71>无菌检查（膜过滤法）
• EP2.7.24病毒载体滴度测定（qPCR法）
• ASTME2694-21流式细胞术活细胞计数
• ISO20645:2004抗菌活性琼脂扩散法

国家标准：

• GB/T38580-2020微生物培养基性能测试（生长率≥0.7）
• ChP20201101无菌检查法（直接接种法）
• GB/T35809-2018乳酸菌活菌计数（MRS琼脂倾注法）
• YY/T1180-2021哺乳动物细胞交叉污染检测（STR分型）
• GB4789.43-2016双歧杆菌鉴定（API50CH生化试验）

方法差异说明：ISO21528与GB4789.3在肠杆菌检测中采用不同选择培养基（VRBGvsEMB）；EP与ChP无菌检查的培养温度存在差异（20-25℃vs23-28℃）；USP内毒素检测要求动态显色法，而ChP允许凝胶法

检测设备

1.生物反应器系统：SartoriusBIOSTATSTR200L（DO控制精度±1%，温度波动±0.1℃）

2.流式细胞仪：BDFACSAriaIII（488/640nm双激光，检测速度25,000cells/s）

3.高效液相色谱：Agilent1260InfinityII（DAD检测器，波长范围190-950nm）

4.全自动细胞计数器：BeckmanCoulterVi-CELLBLU（台盼蓝法CV≤5%）

5.质谱联用系统：ThermoQExactiveHF-X（分辨率240,000@m/z200）

6.微生物鉴定仪：BiologGENIII（可鉴定1,900种细菌）

7.实时荧光定量PCR：RocheLightCycler480II（多色检测通道，温控精度±0.1℃）

8.渗透压仪：AdvancedOSMOPRO3250（测量范围0-3000mOsm/kg）

9.多功能酶标仪：PerkinElmerEnVision（双光栅单色器，波长范围230-1000nm）

10.气相色谱仪：ShimadzuGC-2030（FID检测限≤1pg/s）

11.氨基酸分析仪：HitachiL-8900（分离柱温度精度±0.1℃）

12.激光共聚焦显微镜：LeicaTCSSP8（HyD探测器，分辨率120nm）

13.超速离心机：BeckmanOptimaXPN-100（最大转速100,000rpm）

14.细胞截留系统：RepligenXCellATF（中空纤维膜截留分子量10kDa）

15.在线尾气质谱仪：ExtrelMAX300-LG（O₂/CO₂测量精度±0.005%）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

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