菌株原始种子抗原性测试

检测项目

抗原性指标：

• 抗原浓度：定量检测（μg/mL，参照WHOTRS1011）
• 特异性分析：交叉反应率（≤5%），同源抗体结合率（≥95%）
• 亲和力测定：KD值（nM范围，表面等离子共振法）

微生物纯度：

• 总菌落计数：CFU/mL（参照ISO11737）
• 无菌测试：14天培养阴性（参照USP71）
• 杂菌鉴定：革兰氏染色鉴定

生物活性：

• 效价测试：免疫应答率（ED50值）
• 细胞因子诱导：IL-6水平（pg/mL）

化学成分：

• 蛋白质含量：BCA法测定（mg/mL）
• 核酸杂质：DNA残留（≤10ng/dose）

物理特性：

• 悬浮稳定性：离心沉淀率（≤5%）
• 粒径分布：D50值（μm，参照ISO13320）

遗传稳定性：

• 基因序列一致性：≥99%（PCR-Sanger测序）
• 质粒拷贝数：qPCR定量（copies/cell）

杂质检测：

• 内毒素水平：≤0.25EU/mL（LAL法）
• 宿主细胞蛋白：≤100ppm（ELISA）

安全性测试：

• 细胞毒性：存活率≥90%（MTT法）
• 致热原性：兔体测试阴性

效力验证：

• 免疫原性：抗体滴度（log2值）
• 保护率：动物攻毒模型（≥80%）

稳定性评估：

• 加速老化：25°C/60%RH稳定性（6个月）
• 冻融循环：抗原活性保留≥90%

检测范围

1.疫苗生产用菌株原始种子：细菌类疫苗初始种子库，检测重点为抗原纯度及遗传稳定性，确保批量一致性。

2.重组蛋白表达菌株：大肠杆菌或酵母表达系统，侧重蛋白质抗原浓度与宿主杂质残留。

3.诊断试剂盒用菌株：ELISA或免疫荧光试剂原料，关注特异性及交叉反应阈值。

4.发酵工业菌种原始种子：抗生素或酶生产菌株，检测微生物纯度及生物活性效价。

5.基因工程改造菌株：CRISPR编辑菌种，重点验证基因序列一致性与质粒稳定性。

6.病原体参考菌株：标准菌株库样品，检测抗原性指标用于质量控制。

7.益生菌原始种子：乳酸菌或双歧杆菌，侧重安全性测试及细胞毒性评估。

8.细胞培养用菌株：哺乳动物细胞系种子，检测物理特性与悬浮稳定性。

9.环境微生物种子库：生态样本固定菌株，关注杂质检测及内毒素水平。

10.生物治疗用菌株：活菌制剂初始种子，效力验证与稳定性为核心检测点。

检测方法

国际标准：

• ISO11737-1:2018灭菌产品微生物计数
• WHOTRS1011生物制品抗原定量指南
• USP71无菌测试通用方法
• ISO10993-5:2009医疗器械细胞毒性测试
• ISO13320:2020粒径分析激光衍射法

国家标准：

• GB/T14233.2-2021医用输液器具化学分析方法
• GB/T16886.5-2017医疗器械生物学评价细胞毒性
• GB/T34798-2017分子生物学检测通用要求
• GB/T38506-2020生物制品稳定性试验指南
• GB/T39984-2021蛋白质含量测定BCA法

方法差异说明：国际标准如ISO11737要求CFU计数在特定培养基，而GB/T14233.2扩展至无菌测试温度范围；WHOTRS抗原定量采用ELISA校准曲线，GB/T39984则规范BCA法缓冲液组成；USP71无菌测试周期为14天，GB标准允许7天快速方法用于筛选。

检测设备

1.紫外分光光度计：UV-1800型（波长范围190-900nm，分辨率0.1nm）

2.ELISA微孔板阅读器：MR-96A型（检测通道450nm/650nm，精度±2%）

3.流式细胞仪：FACS-Calibur型（激光波长488nm，检测速度10,000细胞/秒）

4.高压液相色谱仪：LC-20AT型（流速范围0.01-10mL/min，柱温控制±0.1°C）

5.PCR扩增仪：T100型（温控精度±0.2°C，循环数40cycles）

6.表面等离子共振仪：BiacoreX100型（检测限0.1RU，流速1-100μL/min）

7.激光粒径分析仪：Mastersizer3000型（测量范围0.01-3500μm，精度±0.5%）

8.微生物培养箱：BBD-6220型（温度范围4-60°C，湿度控制±0.5%）

9.生物安全柜：BSC-1300II型（洁净等级ClassII，风速0.36m/s）

10.离心机：CF16RX型（转速范围100-16,000rpm，容量6x50mL）

11.凝胶电泳系统：Mini-PROTEAN型（电压范围10-300V，胶尺寸8x10cm）

12.细胞计数器：CountessII型（检测范围1-10^7cells/mL，精度±5%）

13.冻干机：LyostarII型（温度范围-50至50°C，真空度0.1mbar）

14.内毒素检测仪：LAL-100型（灵敏度0.001EU/mL，检测时间15min）

15.稳定性试验箱：THS-150型（温湿度范围5-80°C/10-95%RH，控制精度±0.1°C）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"菌株原始种子抗原性测试"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。