胆汁细胞毒性测试

检测项目

细胞活性检测：

• 细胞存活率：MTT法光密度值（OD570nm≥0.8为阴性参照），CCK-8法增殖抑制率（≤20%合格）
• 克隆形成能力：贴壁细胞克隆数（直径>50μm集落计数参照GB/T16886.5）

细胞膜完整性：

• LDH漏出率：酶标法检测（ΔA490nm≤0.3参照ISO10993-5）
• 台盼蓝拒染率：活细胞计数（≥95%判定阴性）

氧化应激指标：

• MDA含量：硫代巴比妥酸法（≤2.5nmol/mgprot）
• SOD活性：WST-8法（抑制率≥75%参照ASTMF749）
• GSH-Px水平：DTNB比色法（≥25U/mgprot）

凋亡与坏死分析：

• AnnexinV/PI双染：流式细胞仪凋亡率（早期凋亡≤15%）
• Caspase-3活性：荧光底物法（活性增幅≤1.5倍）

炎症因子检测：

• IL-6分泌量：ELISA检测（≤15pg/mL阈值）
• TNF-α表达：化学发光法（浓度梯度≤100pg/mL）

胆盐特异性测试：

• 胆酸结合率：高效液相色谱法（甘氨胆酸结合量≥85%）
• 胆红素稳定性：分光光度法（450nm吸光度变异≤5%）

细胞形态学：

• 细胞骨架观察：F-actin荧光染色（伪足消失率≤10%）
• 超微结构分析：透射电镜线粒体嵴完整性（参照GB/T16886.15）

基因表达谱：

• 毒性相关基因：qPCR检测HSP70、BAX表达量（Ct值ΔΔ≤2）
• DNA损伤：彗星试验尾矩（≤5%参照ISO10993-3）

长期暴露效应：

• 细胞周期阻滞：PI染色G0/G1期比例（±10%基线值）
• 衰老标志物：β-半乳糖苷酶阳性率（≤8%判定标准）

代谢功能检测：

• ATP合成量：荧光素酶法（≥80%对照组）
• 尿素生成率：二乙酰一肟法（原代肝细胞≥1.2μmol/h/10⁶cells）

检测范围

1.胆道金属植入物：镍钛合金支架及钴铬合金缝合针，重点检测胆盐腐蚀下的离子析出毒性

2.聚合物引流管：聚氨酯、硅胶材质导管，评估胆汁长期接触后的增塑剂溶出效应

3.可降解胆管支架：PLGA/PCL材料，监测降解产物对胆管上皮细胞的周期抑制

4.内窥镜涂层材料：PTFE涂层及亲水涂层，验证摩擦脱落微粒的细胞吞噬毒性

5.栓塞微球：载药微球在胆汁环境中的药物突释率及胆红素结合能力

6.人工胆管移植物：脱细胞基质材料，检测胶原暴露引发的巨噬细胞活化

7.胆道造影剂：含碘化合物溶液，评估胆道上皮细胞紧密连接损伤

8.止血材料：明胶海绵及纤维蛋白胶，分析胆红素结晶附着诱导的炎症反应

9.吻合器械涂层：含银抗菌涂层，测定纳米银在胆汁中的团聚毒性

10.一次性胆道扩张球囊：PET材料球囊，验证高压扩张后材料碎片致凋亡效应

检测方法

国际标准：

• ISO10993-5:2023医疗器械生物学评价-体外细胞毒性试验
• ASTMF749-14材料浸提液皮下植入试验
• OECDTG487体外哺乳细胞微核试验

国家标准：

• GB/T16886.5-2022医疗器械生物学评价第5部分：体外细胞毒性试验
• GB/T16886.12-2023样品制备与参照材料
• YY/T0127.15-2022口腔医疗器械生物学评价第15部分：细胞凋亡检测

（方法差异说明：ISO10993-5规定L-929细胞株测试，GB/T16886.5新增人源肝细胞HepG2模型；ASTMF749采用兔源细胞，YY/T0127.15要求原代大鼠肝细胞培养）

检测设备

1.全自动细胞计数仪：CountStarIC1000型（精度±2%，检测范围10⁴-10⁷cells/mL）

2.多功能酶标仪：SpectraMaxi3x（波长范围190-1000nm，温控精度±0.2℃）

3.流式细胞仪：BDFACSCelesta（3激光13色检测，最低检测限50nm颗粒）

4.倒置荧光显微镜：OlympusIX83（60×油镜NA1.42，冷光源寿命≥2000h）

5.超高效液相色谱：WatersACQUITYUPLCH-Class（压力上限15000psi，柱温箱±0.5℃）

6.实时细胞分析系统：ACEAxCELLigenceRTCA（阻抗检测频率10kHz-1MHz）

7.激光共聚焦显微镜：LeicaTCSSP8（分辨率120nm，光谱检测范围410-780nm）

8.全自动生化分析仪：Hitachi7180（检测速度800test/h，交叉污染率≤0.5%）

9.梯度PCR仪：Bio-RadT100（升温速率4℃/s，温控精度±0.1℃）

10.高通量测序仪：IlluminaNextSeq550（单次运行输出120Gb，精度Q30≥85%）

11.超速离心机：BeckmanOptimaXPN-100（最大转速100,000rpm，RCF≥802,000g）

12.厌氧培养工作站：ElectrotekAW500SG（氧浓度控制0.1%-20%，湿度≥95%）

13.电化学工作站：CHI760E（电流分辨率0.1pA，扫描速率0.001-1000V/s）

14.纳米粒度电位仪：MalvernZetasizerPro（粒径检测范围0.3nm-10μm，Zeta电位精度±0.2mV）

15.电感耦合等离子体质谱：PerkinElmerNexION2000（检出限ppt级，质量范围5-270amu）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"胆汁细胞毒性测试"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。