菌株原始种子外源因子分析

检测项目

无菌性检测：

• 无菌测试：无微生物生长（参照USP<71>）
• 培养法检测：需氧/厌氧条件（温度37°C±2°C）
• 快速微生物检测：检测限≤10CFU/mL（参照EP2.6.27）

病毒检测：

• 逆转录病毒筛查：阴性结果（参照ICHQ5A）
• 外源病毒鉴定：PCR检测灵敏度0.1拷贝/μL
• 病毒滴度测定：TCID50法（滴度≤1log10）

支原体检测：

• 培养法检测：无支原体生长（培养时间≥14天）
• PCR检测：引物特异性（检出限≤10copies）
• 荧光检测：荧光信号阴性（参照EP2.6.7）

内毒素检测：

• 鲎试剂法：内毒素限值≤0.25EU/mL（参照USP<85>）
• 光度法检测：吸光度变化范围0.01-0.05
• 凝胶法检测：无凝胶形成

DNA/RNA分析：

• 残留宿主DNA检测：定量PCR（检出限≤10pg/mg）
• RNA完整性检测：RIN值≥7.0（参照ISO20395）
• 核酸序列分析：序列匹配度≥99%

细胞培养检测：

• 细胞活力检测：活细胞率≥90%
• 细胞形态观察：无异常形态（参照EP2.7.1）
• 细胞计数：计数精度±5%

微生物鉴定：

• 细菌鉴定：16SrRNA测序（参照ISO11737）
• 真菌鉴定：JianCe区域分析（检出限≤1CFU）
• 微生物多样性检测：群落丰度指数

残留蛋白检测：

• ELISA检测：残留蛋白浓度≤1ng/mL
• Westernblot分析：条带清晰度（参照EP2.6.21）
• 质谱检测：肽段覆盖率≥95%

抗生素耐药性检测：

• 最小抑菌浓度：MIC值≤2μg/mL
• 耐药基因筛查：PCR阴性（参照CLSIM100）
• 表型耐药检测：抑菌圈直径≥15mm

物理特性检测：

• 浊度检测：NTU值≤1.0
• pH值测定：pH7.0±0.5
• 渗透压检测：渗透压280-320mOsm/kg

检测范围

1.细菌原始种子：涵盖大肠杆菌和枯草芽孢杆菌等，重点检测外源细菌污染和抗生素耐药性

2.病毒原始种子：包括腺病毒和逆转录病毒载体，侧重病毒颗粒完整性和外源病毒筛查

3.酵母原始种子：如酿酒酵母和毕赤酵母，核心检测酵母特异性污染物和发酵稳定性

4.哺乳动物细胞原始种子：CHO和HEK293细胞系，重点评估细胞活力、支原体污染和残留DNA

5.昆虫细胞原始种子：Sf9和HighFive细胞，检测重点为病毒载体整合和细胞形态异常

6.植物细胞原始种子：烟草和拟南芥细胞，侧重真菌污染和核酸残留分析

7.重组蛋白表达种子：各类表达系统种子，核心检测残留宿主蛋白和表达效率

8.疫苗生产种子：流感疫苗和mRNA疫苗种子，重点进行无菌性测试和病毒安全性验证

9.诊断试剂生产种子：酶和抗体生产种子，检测内毒素水平和微生物限度

10.发酵工业种子：工业微生物如乳酸菌，侧重发酵产物纯度和物理特性控制

检测方法

国际标准：

• ICHQ5A病毒安全性评价（检测限差异：ICH要求更严格）
• EP2.6.7支原体检测（培养时间28天，比USP长）
• USP<71>无菌测试（方法：膜过滤法）
• ISO11737微生物计数（采用膜过滤技术）
• ISO20395核酸分析（灵敏度要求高于国家标准）

国家标准：

• 中国药典1101无菌检查法（培养条件差异：温度25-30°C）
• 中国药典3401细菌内毒素检查（鲎试剂法与EP类似）
• GB/T37861微生物鉴定（基于16SrRNA测序）
• GB/T39296细胞培养检测（细胞活力标准≥85%）
• GB/T40201DNA残留检测（定量PCR方法，检出限10pg）

（方法差异说明：国际标准如ICHQ5A强调病毒检测全面性，而国家标准如中国药典更注重培养时间控制；EP支原体检测要求更长培养期，USP无菌测试采用不同过滤技术；ISO核酸分析灵敏度高，GB标准在细胞检测中参数略宽松）

检测设备

1.PCR仪：型号PCR-2000（热循环范围4-99°C，精度±0.1°C）

2.流式细胞仪：型号FCM-5000（检测通道10个，流速1-60μL/min）

3.显微镜：型号MIC-100（放大倍数1000X，分辨率0.2μm）

4.培养箱：型号INC-300（温度范围20-60°C，湿度控制±2%）

5.离心机：型号CENT-400（转速100-15000rpm，容量50mL）

6.分光光度计：型号SPEC-250（波长范围190-1100nm，精度±0.001AU）

7.ELISA阅读器：型号ELISA-800（检测波长450nm，动态范围0-4OD）

8.核酸提取仪：型号NEX-150（提取效率≥95%，通量96样本）

9.生物反应器：型号BIO-500（容积5L，pH控制±0.1）

10.质谱仪：型号MS-1000（质量范围50-2000m/z，分辨率10000）

11.色谱仪：型号HPLC-600（流速0.1-10mL/min，检测限1ng）

12.电泳仪：型号GEL-200（电压范围10-300V，凝胶尺寸10cm）

13.细胞计数器：型号CELL-COUNT（计数精度±1%，样本量20μL）

14.温度控制设备：型号TEMP-CONT（温度范围-80至150°C，稳定性±0.5°C）

15.灭菌设备：型号STERI-100（压力1-3bar，温度121°C±1°C）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"菌株原始种子外源因子分析"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。