啤酒志贺氏菌试验

检测项目

初步筛查检测：

• 增菌培养：志贺氏菌增菌效率（培养时间24-48h，参照ISO6579）
• 快速检测法：免疫层析阳性/阴性判定（检测限≤10CFU/g）
• 样品预处理：均质稀释倍数（1:10，参照GB4789.5）

分离培养：

• 平板划线分离：菌落形态特征（大小0.5-3mm，颜色无色）
• 选择性培养基：XLD琼脂生长率（≥80%，参照ISO6579）
• 纯化培养：传代稳定性（传代次数≤3）

生化鉴定：

• 糖发酵试验：乳糖阴性、葡萄糖阳性（阳性/阴性判定）
• IMViC试验：吲哚阴性、甲基红阳性（参照API20E）
• 硫化氢产生：阴性判定（TSI斜面观察）

血清学确认：

• 凝集试验：血清群鉴定（A、B、C、D群，阳性反应）
• 特异性抗体检测：交叉反应排除（假阳性率≤5%）
• 分型分析：志贺氏菌亚型（血清型1-50）

分子生物学检测：

• PCR定性检测：ipaH基因靶点（检测限≤10CFU/mL）
• 实时荧光PCR：定量Ct值（参照ISO/TS21569）
• 基因测序：16SrRNA同源性分析（相似度≥99%）

定量分析：

• MPN法：最近似数计数（三管法，参照GB4789.3）
• 平板计数：CFU/mL测定（精度±0.5log，参照ISO4833）
• 菌液稀释：梯度稀释倍数（10^-1至10^-6）

药敏试验：

• 抗菌敏感性：MIC值测定（范围0.03-256μg/mL，参照CLSIM100）
• 耐药性模式：β-内酰胺酶检测（阳性/阴性）
• 抑菌圈直径：误差±1mm（参照EUCAST）

环境监测：

• 表面拭子采样：志贺氏菌检出率（采样面积100cm²）
• 空气微生物负载：撞击法计数（CFU/m³）
• 水质检测：总大肠菌群关联分析（参照ISO9308）

培养基验证：

• 选择性培养基性能：灵敏度≥90%、特异性≥95%
• 生长促进测试：复苏率≥70%（参照GB4789.28）
• 无菌控制：阴性对照符合率100%

质量控制：

• 阳性对照：标准菌株使用（ATCC12022，存活率≥95%）
• 重复性测试：相对标准偏差≤10%
• 记录追溯：检测数据完整性（保存期≥5年）

检测范围

1.成品啤酒：涵盖各类包装啤酒（铝罐、玻璃瓶），重点检测终产品志贺氏菌污染及保存期稳定性。

2.酿造用水：包括水源及处理水，侧重检测志贺氏菌携带风险及水质微生物指标。

3.麦芽原料：大麦麦芽及辅料，重点检测原料污染源及热处理后残留菌量。

4.啤酒花：干花或提取物，检测添加剂微生物负载及储存条件影响。

5.酵母培养物：发酵剂酵母，侧重检测纯度和污染交叉反应。

6.发酵醪：发酵过程液体，重点监控志贺氏菌生长动态及抑制效果。

7.过滤后啤酒：半成品啤酒，检测过滤效率及残余病原体。

8.包装材料：瓶盖、标签等，侧重表面拭子检测预防二次污染。

9.生产环境样本：设备表面、空气采样，重点监测清洁消毒后的残留菌。

10.废水及残留物：酿造废液和渣滓，检测排放标准符合性及生物负载。

检测方法

国际标准：

• ISO6579:2017微生物学-食品链中志贺氏菌检测（使用XLD琼脂，增菌时间24h）
• ISO7218:2007微生物学-食品和动物饲料的微生物检验通则（通用操作规范）
• ISO4833-1:2013微生物学-总菌落计数（平板法，培养温度30℃）
• ISO/TS21569-2:2012分子生物学检测方法（实时PCR流程）

国家标准：

• GB4789.5-2012食品安全国家标准食品微生物学检验志贺氏菌检验（使用SS琼脂，增菌时间48h）
• GB4789.2-2022食品微生物学检验菌落总数测定（倾注法，培养温度36℃）
• GB4789.28-2013培养基和试剂质量要求（验证参数标准）
• GB/T5750.12-2006生活饮用水标准检验方法微生物指标（MPN法差异）

方法差异说明：ISO6579指定XLD琼脂用于分离，而GB4789.5优先使用SS琼脂；ISO增菌时间为24小时，GB延长至48小时以提高灵敏度；ISO4833平板培养温度为30℃，GB4789.2调整为36℃以适应国内环境；分子检测中，ISO/TS21569要求实时PCR循环参数，GB标准未细化此点。

检测设备

1.恒温培养箱：MemmertIN55型（温度范围0-60℃，精度±0.1℃）

2.生物安全柜：BakerSG603型（ClassIIA2，风速0.5m/s）

3.自动菌落计数器：Scan500型（分辨率0.1mm，容量500板）

4.实时荧光PCR仪：QuantStudio5型（96孔，检测通道4个）

5.离心机：Eppendorf5810R型（转速300-15000rpm，容量4×100mL）

6.光学显微镜：OlympusCX43型（放大倍率40-1000×，相衬功能）

7.恒温水浴箱：JulaboF12型（温度范围5-99℃，稳定性±0.01℃）

8.高压蒸汽灭菌器：SystecDX-65型（容积65L，温度121℃）

9.超低温冷冻箱：HaierDW-86L338型（温度-86℃，容量338L）

10.生化鉴定系统：VITEK2型（测试卡30项，自动化读数）

11.免疫层析读仪：GenLineReader（检测时间≤15min，灵敏度99%）

12.分光光度计：UV-1800型（波长范围190-1100nm，带宽1nm）

13.均质器：BagMixer400型（拍打速度8次/s，袋容量400mL）

14.pH计：SevenCompact型（精度±0.001，温度补偿）

15.自动取样工作站：GX-271型（96孔板处理，移液精度±1%）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"啤酒志贺氏菌试验"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。